科普｜培養的細胞出問題了？那是因為你沒注意這些（上）

很多小夥伴在養細胞的時候，總是會出現這樣或那樣的問題，很多時候，那是因為你沒有注意以下的細節問題，現在我們一起來看看：

1.細胞培養前的準備

在您帶上手套開始細胞培養之前，先檢查一下移液管和瓶子的數量是否充足，以免在開始實驗後再次出入操作檯，這樣可以降低細胞汙染的風險。

細胞培養基也應先預熱，選擇只預熱部分培養基而非整瓶加熱，不但可以節約實驗時間，而且可以避免因反覆加熱培養基而造成的蛋白質降解。

結束操作後，別忘了培養基對光敏感，應儘可能避光儲存。

2.細胞培養的定期檢查

定期檢查培養細胞的形態，即形狀和外觀，對於細胞培養實驗取得成功至關重要。

除確認細胞的健康狀態外，每次操作細胞時透過肉眼和顯微鏡檢查細胞還可早期發現汙染徵象，避免汙染擴散至實驗室其他細胞。

3.細胞變質的徵象

細胞變質的徵象包括核周出現顆粒、細胞與基質解離以及細胞質空泡形成。

這些變質徵象可能為多種原因所致，例如：

培養物汙染、細胞系衰老或培養基中存在毒性物質，或者這些徵象僅表明培養物需要更換培養基。

變質嚴重時將會成為不可逆的變化。

4.細胞培養通風櫥的消毒及佈局

1、保持細胞培養通風櫥內的整潔有序，將所有物品置於直視範圍內。

2、

向放入通風櫥內的所有物品噴灑70%乙醇，擦拭清潔進行消毒。

3、在通風櫥中部開闊處放置細胞培養容器；移液器置於右前方易於取用；試劑和培養基置於右後方便於吸取；試管架置於中後部；小型容器置於左後部用於盛放廢液。

5.培養瓶/皿等物品的無菌操作

無菌培養瓶、試劑瓶、培養皿等物品使用時方可揭開蓋子，不得將其開放暴露於環境中，操作完成後儘快蓋上蓋子，取下蓋子時應將蓋子開口朝下放在工作臺面上。

進行無菌操作時不要說話、唱歌或吹口哨。儘快完成實驗，以儘量避免汙染。

6.細胞培養中可能的汙染物

細胞培養汙染物主要分為兩類：

1、化學汙染物，如培養基、血清和水中的雜質、內毒素、增塑劑和去汙劑。

2、

生物汙染物，如細菌、黴菌、酵母、病毒、支原體以及其他細胞系的交叉汙染。

可透過充分了解汙染源以及採用良好的無菌技術，降低汙染髮生的頻率和嚴重程度。

7.交叉汙染的確認

交叉汙染雖不如微生物汙染普遍，但與HELA細胞及其他生長迅速的細胞系間廣泛的交叉汙染是個明確的問題，會造成嚴重後果。

從聲譽好的細胞庫獲取細胞系、定期檢查細胞系性質及採用良好的無菌技術有助於避免交叉汙染。

透過DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可確認有無交叉汙染。

8.細胞換液注意事項

為細胞換液時，要沿著培養瓶的一側輕輕地加入，而不是直接加到細胞中，以免損傷細胞，當培養的細胞株較為脆弱時尤其需要注意。

使用無菌玻璃吸管或一次性塑膠吸管和移液器操作液體時，每支吸管只能使用一次，以免交叉汙染。

9.細胞傳代的時間把握

當細胞呈指數增殖，貼壁培養的細胞已佔據所有可用基質、沒有擴增空間，或懸浮培養的細胞已超過培養基質所支撐的能力，無法進一步生長時，細胞增殖速度將大大降低甚至完全停止。

為了將細胞密度維持在最佳水平，以便細胞繼續生長，並且刺激進一步增殖，必須對細胞進行傳代。

10.細胞培養中使用抗生素的注意事項

細胞培養時不應長期使用抗生素，因為連續使用抗生素會促進抗生素耐藥性細胞株的產生，導致輕度汙染持續存在。

抗生素只能作為對付汙染的最後手段短期使用，並儘快撤除。

如果長期使用抗生素，則應同時進行無抗生素培養，以便作為鑑別隱性感染的對照。

11.細胞凍存的必要性

連續培養的細胞系容易發生遺傳漂變，有限細胞系最終會發生衰老，所有培養的細胞都易受到微生物汙染，即使運轉情況最好的實驗室也會遇到裝置故障的問題。

由於已建立的細胞系是一種寶貴資源，更換細胞系成本高昂，而且耗費時間，因此，必須將其冷凍起來，長期儲存。

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