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所有菌株一旦進入實驗室,必須儘快驗證,之後才能在實驗中使用

2022-06-10由 東山小明哥 發表于 漁業

質粒圖譜是什麼

9。選擇和培養攜帶重組質粒的菌落。藍色或白色菌落在軟瓊脂中可以發生在幾個不同的方位,通常好像遠方傾斜的星系。不管什麼方位,它們可以容易地用無菌接種針或無菌牙籤刺入薄層軟瓊脂挑取,將接種物轉移到一管含有適當抗生素的培養基中。

大腸桿菌菌株(未轉化或轉化質粒)通常是以瓊脂穿刺培養物的形式透過郵件傳送。所有菌株一旦進入實驗室, 就必須儘快驗證,之後才能在實驗中使用。

1。轉接一個菌環量的穿刺培養物到3mL含適量抗生素和必要新增物的液體培養基中。在適當的溫度溫育培養基18~24h,並劇烈振盪。

所有菌株一旦進入實驗室,必須儘快驗證,之後才能在實驗中使用

2。當液體培養物長好後,用菌液在含適量抗生素和必要新增物的瓊脂平板上劃線。在適當的溫度下過夜孵育平板。

3。檢查平板上所有的菌落外觀是否一致,外形和氣味是否與大腸桿菌相同。挑取單個菌落到合適的選擇性培養基上,以驗證該菌株的基因型。

將挑選出的菌落進行小規模(3mL)液體培養。如果細菌含有轉化質粒,用約2mL培養物小規模製備質粒DNA。用不同的限制性內切核酸酶消化質粒DNA,消化產物透過瓊脂糖凝膠電泳分析。

所有菌株一旦進入實驗室,必須儘快驗證,之後才能在實驗中使用

根據傳送者提供或文獻中公佈的質粒圖譜,比較所觀察到的條帶大小與預期是否相符。

4。影印傳送菌株附帶的所有書面材料,將影印件插入你的實驗室筆記本中。

5。如果沒有提供菌株的基因型,可以查詢相關文獻或線上資源,以確定菌株是否含有可能會影響它實用性的瑕疵。許多常用的大腸桿菌菌株的基因型名單可以在獲取。