His標籤蛋白純化中如何避免金屬離子脫落？
2023-01-12由 科諾賽生物 發表于 漁業
設計引物his標籤怎麼加
在進行His標籤蛋白純化的實驗過程中，如何解決EDTA（螯合劑）和DTT（還原劑）的耐受問題，避免金屬離子脫落呢？
His標籤蛋白純化通常採用固定化金屬離子親和層析（IMAC）純化的方法，主要利用介質配體螯合的金屬離子吸附純化表面帶組氨酸殘基的蛋白。Ni
2+
、Co
2+
和Cu
2+
是His標籤蛋白純化中使用較為廣泛的金屬離子，因為它們在水溶液中與組氨酸具有較好的親和性。其中，Ni
2+
（鎳離子）是親和純化（鎳柱純化實驗中最常使用的，Ni
2+
（鎳離子）在瓊脂糖上的螯合形式多樣，不同的螯合結構，決定了Ni
2+
在層析介質上的穩定性和結合能力。傳統的His標籤蛋白純化介質最常用兩種配基：次氮基三乙酸（NTA）和亞氨基二乙酸（IDA），通常情況下都是比較穩定的。
在細胞培養，尤其是酵母、CHO、昆蟲桿狀病毒等真核分泌表達過程中，通常會加入EDTA和DTT，如果使用傳統的His標籤蛋白純化介質，會導致金屬離子有一定的脫落，所以在進行純化 His標籤
實驗之前
，需要提前進行緩衝液的置換來去除EDTA或者DTT，過程
繁雜冗長
，而且會降低蛋白的活性。
經過實驗和測試
Ni-TED
Chromrose
FF鎳親和層析介質
可以
解決EDTA和DTT的耐受問題，避免金屬離子脫落，此介質
強力的螯合配基TED與Ni
2+
形成5個螯合位點（和EDTA與Ni的螯合類似），使Ni
2+
異常穩定，其螯合後的藍色也更深。
產品特點：
最高耐受100mM EDTA和10mM DTT，無需進行樣品前處理，簡化實驗流程，保護蛋白活性；
螯合Ni2+離子非常牢固，幾乎零脫落；
清洗再生步驟簡單，無需脫鎳直接進行NaOH清洗；
高動態結合載量28
mgHis標籤蛋白/mL介質。
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