膽鹼乙醯膽鹼檢測試劑盒的應用

背景

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膽鹼乙醯膽鹼檢測試劑盒提供了一種簡單、高靈敏的方法來定量檢測各種生物學標本中膽鹼和乙醯膽鹼的含量。試劑盒基本原理如下：遊離的膽鹼可被甜菜鹼醛氧化成甜菜鹼（βine），反應產物可與膽鹼探針相互作用產生顏色或者熒光，從而可被普通酶標儀（570 nm）或者熒光計檢測（Ex/Em=535/587 nm）檢測到。乙醯膽鹼則可先使用乙醯膽鹼酯酶轉換成膽鹼，然後再進行檢測。試劑盒適用於多種型別標本：血液、細胞、培養基、發酵培養基等，而不需要對標本進行前期處理或純化。試劑盒可檢測到10 pmol~5 nmol的膽鹼或乙醯膽鹼。

膽鹼乙醯膽鹼檢測試劑盒

膽鹼是一種強有機鹼，是卵磷脂的組成成分，也存在於神經鞘磷脂之中，是機體可變甲基的一個來源而作用於合成甲基的產物，同時又是乙醯膽鹼的前體。乙醯膽鹼（AcetylCholine，ACh）是一種神經遞質，能特異性的作用於各類膽鹼受體，在組織內迅速被膽鹼酯酶破壞，其作用廣泛，選擇性不高。在神經細胞中，乙醯膽鹼是由膽鹼和乙醯輔酶A在膽鹼乙醯移位酶（膽鹼乙醯化酶）的催化作用下合成的。膽鹼和乙醯膽鹼在許多生物學過程中發揮重要的作用。

乙醯膽鹼，是一種神經遞質。在組織內迅速被膽鹼酯酶破壞。乙醯膽鹼能特異性地作用於各類膽鹼受體，但其作用廣泛，選擇性不高。臨床不作為藥用，一般只做實驗用藥。在神經細胞中，乙醯膽鹼是由膽鹼和乙醯輔酶A在膽鹼乙醯移位酶（膽鹼乙醯化酶）的催化作用下合成的。主流研究認為人體內該物質含量增多與阿爾茲海默病（老年痴呆症）的症狀改善顯著相關。

應用

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用於豬腦乙醯膽鹼酯酶的分離純化及性質和功能基團研究

神經遞質乙醯膽鹼及膽鹼能系統，即乙醯膽鹼合成的酶系、兩類乙醯膽鹼受體和乙醯膽鹼酯酶等，廣泛存在於動植物體內，並參與一些重要生理過程的調節。乙醯膽鹼酯酶（acetylcholinesterase，AChE）是一類水解酶，在動物神經傳導中起重要作用，能高效地將神經遞質乙醯膽鹼水解為乙酸和膽鹼，從而保證神經衝動在突觸間的正常傳導。乙醯膽鹼酯酶還具有非催化功能，參與細胞的發育和成熟，參與細胞遷移、粘附和凋亡，促進神經元發育和神經再生，促進造血細胞形成以及影響炎症和免疫反應。

以來源廣泛、廉價的豬腦為材料，對乙醯膽鹼酯酶進行了分離純化以及部分酶學性質的研究，以期為該酶的來源及進一步研究和豬腦的綜合開發利用提供科學參考。

其結果如下：1。豬腦乙醯膽鹼酯酶的分離純化以新鮮豬腦為原材料，經過勻漿離心、硫酸銨分級沉澱、DEAE-Sepharose離子交換層析和Superdex-200凝膠過濾層析，分離純化獲得電泳純乙醯膽鹼酯酶。比活力2。05U/mg，純化倍數為26。97倍，酶活回收率為11。95%。

2。 豬腦乙醯膽鹼酯酶的性質研究豬腦乙醯膽鹼酯酶全酶相對分子量257。30kD，亞基相對分子量66。94kD，推測該酶由四個相同亞基組成。該酶催化碘化硫代乙醯膽鹼最適溫度為37℃，最適pH為7。4，該酶在40℃以下，酶活力保持穩定，在pH6。0～8。0範圍內較穩定；該酶的最佳底物是碘化硫代乙醯膽鹼；當底物濃度超過4。0mmol/L時，表現出過量底物抑制現象，該酶的表觀Km為0。94mm

3。 有機溶劑、化合物及金屬離子對豬腦乙醯膽鹼酯酶的影響乙醇、異丙醇、SDS、過氧化氫、抗壞血酸、草酸和脲素對豬腦乙醯膽鹼酯酶有明顯的抑制作用；低濃度的EDTA-Na2對該酶則表現出一定的啟用作用；濃度較低的Mg2+對該酶表現出啟用作用，Ba2+和Zn2+對該酶有強烈的抑制作用。

4。豬腦乙醯膽鹼酯酶功能集團的研究採用化學修飾劑對該酶的功能基團進行修飾，結果表明：半胱氨酸巰基、甲硫氨酸殘基、組氨酸咪唑基和絲氨酸殘基可能是豬腦乙醯膽鹼酯酶活性中心的必需基團，參與了該酶活性中心的構成。二硫鍵可能是維持豬腦乙醯膽鹼酯酶活性所必需的基團。而精氨酸胍基、酪氨酸酚羥基、賴氨酸殘基和色氨酸殘基可能不是該酶活性中心的必需基團，並不參與該酶活性中心的構成。

參考文獻

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［2］Expression of the housefly acetylcholinesterase in a bioreactor and its potential application in the detection of pesticide residues［J］。Guo-Jun Lang，Jin-Yan Shang，Yan-Xia Chen，Ying-Jun Cui，Qiang Wang，Zhen-Hua Tang，Chuan-Xi Zhang。World Journal of Microbiology and Biotechnology。2010（10）

［3］Recombinant expression and biochemical characterization of the catalytic domain of acetylcholinesterase-1 from the African malaria mosquito，Anopheles gambiae［J］。Haobo Jiang，Siwei Liu，Picheng Zhao，Carey Pope。Insect Biochemistry and Molecular Biology。2009（9）

［4］Cloning and expression of carp acetylcholinesterase gene in Pichia pastoris and characterization of the recombinant enzyme［J］。Ryohei Sato，Toru Matsumoto，Norio Hidaka，Yasuko Imai，Katsumasa Abe，Shouji Takahashi，Ryo-hei Yamada，Yoshio Kera。Protein Expression and Purification。2008（2）

［5］王潔。豬腦乙醯膽鹼酯酶的分離純化及性質和功能基團研究［D］。西南大學，2014。