抗體純化的方法—三步法層析純化方案

抗體是由抗原進入機體刺激B細胞分化增殖為漿細胞而合成並分泌的一類能與相應抗原發生特異性結合併產生免疫效應的球蛋白，單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。單克隆抗體下游純化工藝比雙抗和ADC純化工藝更成熟，主要包括：ProteinA捕獲及精細純化步驟。

抗體純化三步法

STEP 1 捕獲

親和層析

從初始樣品中（細胞原液）分離抗體，這步驟主要是中和pH上樣，低pH洗脫的，把單抗從培養液中快速地捕獲出來的最關鍵步驟，此步驟可以去除大量的HCP，單抗去摺疊片段，病毒及HCD和培養基組分物質。

圖2。 親和層析原理圖

STEP 2 精純

強陽離子離子交換層析（結合/洗脫模式）

陽離子交換層析在純化工藝中起著非常重要的作用，可以達到很好的去除雜質效果，進一步去除HCP，脫落的ProteinA，抗體聚集體，片段及其他異構體。

STEP 3 精純

強陰離子交換層析（流穿模式）

大部分單抗PI值大於7，在中和pH上樣條件下大部分蛋白帶正電荷，流穿下來，這步操作不僅能去除雜質蛋白，聚集體，內毒素，最重要的是能去除病毒，更進一步提高藥物安全性。因大部分病毒在pH>7緩衝條件下帶負電荷，可以和帶正電荷的季銨陽離子結合，從而達到消除病毒的作用。