保健食品中紅景天苷和酪醇的測定

1 範圍

本方法規定了以紅景天為主要原料的保健食品中紅景天苷和酪醇的液相色譜測定方法。

本方法適用於保健食品中紅景天苷和酪醇的測定。

2 原理

試樣經甲醇超聲提取，以0。01mol/L乙酸銨-甲醇為流動相（80+20），採用高效液相色譜法，紫外檢測器檢測，根據保留時間定性，外標法定量。

3 試劑和材料

注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。

3。1試劑

3。1。1乙酸銨（CH3COONH4）。

3。1。2甲醇（CH3OH）：色譜純。

3。1。3甲醇（CH3OH）。

3。2標準品

紅景天苷、酪醇標準樣品的分子式、相對分子量、CAS登入號見表1，純度≥98%，或經國家認證並授予標準物質證書的標準物質。

表1 紅景天苷、酪醇標準樣品的中文名稱、英文名稱、CAS登入號、分子式、相對分子量

3。3標準溶液配製

3。3。1紅景天苷標準儲備液（2。0mg/mL）：準確稱取紅景天苷標準品20mg（精確至0。01mg）於10mL容量瓶中，用甲醇（3。1。2）溶解並定容至刻度，搖勻。

3。3。2紅景天苷標準工作液：將紅景天苷標準儲備液（3。3。1）用甲醇（3。1。2）稀釋製備一系列標準溶液，標準系列濃度為0。00mg/mL、0。01mg/mL、0。02mg/mL、0。05mg/mL、0。20mg/mL、0。50mg/mL，臨用時配製。

3。3。3酪醇標準儲備液（2。0mg/mL）：準確稱取酪醇標準品20mg（精確至0。01mg）於10mL容量瓶中，用甲醇（3。1。2）溶解並定容至刻度，搖勻。

3。3。4酪醇標準工作液：將酪醇標準儲備液（3。3。3）用甲醇（3。1。2）稀釋製備一系列標準溶液，標準系列濃度為0。00mg/mL、0。01mg/mL、0。02mg/mL、0。05mg/mL、0。10mg/mL、0。20mg/mL，臨用時配製。

3。3。5系統適用性溶液：量取紅景天苷標準儲備液（3。3。1）和酪醇標準儲備液（3。3。3）各0。5mL於10mL容量瓶中，用甲醇（3。1。2）稀釋至刻度，搖勻。

3。4試劑配製

乙酸銨溶液（0。01mol/L）：稱取0。77g乙酸銨，加入適量水溶解並定容至1000mL，經0。45μm濾膜（3。5。1）過濾後備用。

3。5

材料

3。5。1水相微孔濾膜：0。45m。

3。5。2有機相微孔濾膜：0。45m。

4 儀器和裝置

4。1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器（UV）。

4。2超聲波清洗器。

4。3分析天平：感量為0。01mg和0。0001g。

5 分析步驟

5。1試樣製備

5。1。1固體樣品：準確稱取已粉碎混合均勻的固體待測試樣適量（約含紅景天苷5mg）於 25mL容量瓶中，加入甲醇（3。1。3）約20mL，超聲提取30min，放冷至室溫，用甲醇（3。1。3）定容至刻度。混勻後經0。45μm濾膜（3。5。2）過濾，供液相色譜分析用。

5。1。2液體樣品：準確吸取搖勻後的待測試樣適量（約含紅景天苷5mg），置於蒸發皿內，水浴蒸乾，用甲醇溶解並（3。1。3）轉移至25mL容量瓶中並定容至刻度。混勻後經0。45μm濾膜（3。5。2）過濾，供液相色譜分析用。

5。2儀器參考條件

5。2。1色譜柱：C18柱， 250mm×4。6mm， 5μm，或同等效能色譜柱；

5。2。2流動相：乙酸銨溶液（0。01mol/L）-甲醇（80+20）；

5。2。3流速：1。0mL/min；

5。2。4柱溫：25℃；

5。2。5檢測波長：215nm；

5。2。6進樣量：10mL。

5。2。7系統適用性試驗：取系統適用性溶液（3。3。5）10mL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，紅景天苷峰與酪醇峰的分離度應大於1。5。

5。3標準曲線的製作

將紅景天苷標準系列工作液（3。3。2）或酪醇標準系列工作液（3。3。4）分別注入高效液相色譜儀中，測定相應的色譜峰高或峰面積，以標準工作液的濃度為橫座標，以峰面積或峰高為縱座標，繪製標準曲線（標準溶液液相色譜圖見附錄A中圖A。1）。

5。4試樣溶液的測定

將試樣待測液（5。1。1或5。1。2）注入液相色譜儀中，以保留時間定性，測得峰面積或峰高，根據標準曲線得到待測液紅景天苷或酪醇的濃度（樣品溶液液相色譜圖見附錄A中圖A。2）。

6 結果計算

試樣中紅景天苷或酪醇含量按下式計算：

式中：

X

—試樣中紅景天苷或酪醇的含量，單位為毫克每克或毫克每毫升（mg/g或mg/mL）；

C

—由標準曲線查得待測樣液中紅景天苷或酪醇的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；

V

—樣品的定容體積，單位為毫升（mL）；

m

—樣品量，單位為克或毫升（g或mL）。

計算結果以重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留兩位有效數字。

7 精密度

在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

（來源：總局；編髮：北京天健華成國際投資顧問有限公司保健食品註冊部）