解決方案丨豬肉中四環素類、磺胺類和喹諾酮類藥物多殘留量的測定

豬肉中四環素類、磺胺類和喹諾酮類藥物多殘留量的測定

四環素類藥物 （TCs）、磺胺類藥物 （SAs）和喹諾酮類藥物 （QNs）是畜牧養殖中常用到的三類藥物，常用來治療或預防雞的細菌、支原體和球蟲感染，但若使用不當會導致其在動物源性食品中的殘留超標， 影響人類健康， 並且會使細菌的耐藥性增強。

2022年2月1日，

GB 31658。17-2021《食品安全國家標準 動物性食品中四環素類、磺胺類和喹諾酮類多殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》

正式實施，本文參考上述標準，試樣中殘留的四環素類、磺胺類和喹諾酮類藥物，用Mcllvaine-Na2EDTA緩衝液提取，使用HLB柱經睿科Fotector Plus全自動固相萃取儀淨化，洗脫液經睿科 EVA 80全自動氮吹儀濃縮，液相色譜-串聯質譜法測定，外標法定量。

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儀器和耗材

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儀器

Fotector Plus全自動固相萃取儀

EVA 80 高通量全自動平行濃縮儀

Agilent 1290Ⅱ/6470高效液相色譜-串聯質譜儀

Fotector Plus

全自動固相萃取儀

EVA 80 高通量

全自動平行濃縮儀

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耗材

HLB固相萃取柱（RayCure，200 mg/6 mL）

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試劑

甲醇（優級純）

乙腈（優級純）

正己烷（優級純）

超純水

0。05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液：取磷酸二氫鈉7。8 g，用水溶解並稀釋至1000 mL。

0。05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液：取磷酸氫二鈉17。9 g，用水溶解並稀釋至1000 mL。

磷酸鹽緩衝液：取0。05 mol/L磷酸二氫鈉溶液190 mL，用0。05 mol/L磷酸氫二鈉溶液稀釋至1000 mL。

1 mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4 g，用水溶解並稀釋至100 mL。

0。03 mol/L氫氧化鈉溶液：取1 mol/L氫氧化鈉溶液3 mL，用水稀釋至100 mL。

Mcllvaine-Na2EDTA緩衝液：取檸檬酸12。9 g、磷酸氫二鈉10。9 g、乙二胺四乙酸二鈉39。2 g，加水900 mL，用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調pH值至5。0±0。2，用水稀釋至1000 mL。

洗脫液：取甲醇150 mL，加乙酸乙酯150 mL、濃氨水6 mL，混勻。

復溶液：取水40 mL，加甲醇5 mL、乙腈5 mL、甲酸0。05 mL，混勻。

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樣品製備

取試樣1 g（準確至±0。01 g）於50 mL離心管，加入Mcllvaine-Na2EDTA緩衝液8 mL，渦旋1 min，超聲20 min，高速冷凍離心5 min，收集上清液。下層殘渣中加磷酸鹽緩衝液8 mL，重複提取一次，合併兩次提取液，混勻，備用。

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淨化

將HLB固相萃取柱安裝在Fotector Plus全自動固相萃取儀上，依次用甲醇5 mL、水5 mL活化，取備用液過柱，依次用5 mL水和20%甲醇水溶液5 mL淋洗，吹乾，用洗脫液10 mL洗脫。收集洗脫液於EVA-80全自動平行濃縮儀中45 ℃水浴氮氣吹乾。加入復溶液1。0 mL，渦旋1 min溶解殘餘物，微孔濾膜過濾，液相色譜-串聯質譜測定。

具體的固相萃取方法見圖3。

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固相萃取淨化條件

Fotector Plus固相萃取方法

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液質檢測條件

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液相條件

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液相梯度洗脫條件

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質樸儀器引數

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MRM引數

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色譜圖

四環素類、磺胺類和喹諾酮類藥物標準溶液總離子流圖（20μg/L）

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結果與討論

為了驗證該方法的回收率，本實驗在空白豬肉樣品中加入四環素類、喹諾酮類和磺胺類標準品進行加標回收驗證（n=3），並採用基質標準曲線定量，資料結果如表-2所示。加標回收率在62。4%~105。6%之間，RSD值控制在15%以內，滿足標準要求，說明該方法能夠很好地運用於動物性食品中四環素類、喹諾酮類和磺胺類多殘留量的檢測。

表-2。豬肉樣品加標回收率及RSD值

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總結

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在超聲提取步驟時使用冰水浴來進行20 min的超聲，可減少由於長時間超聲引起的溫度升高，而造成目標物的損失。

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應避免樣品在濃縮過程中長時間氮吹、過分濃縮乾燥，否則可能會造成回收率損失。

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本方法使用睿科Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀可實現淨化過程的自動化，

從活化到上樣、洗脫一步到位；最多一天能夠處理180個樣品

，高效便捷地完成固相萃取過程。同時搭配睿科Auto EVA 80高通量全自動平行濃縮儀進行濃縮，二者的樣品架可相容使用，無需進行樣品轉移，操作連貫簡便，避免樣品的損失。