「傑論系列」JAK2、MPL、CALR等驅動基因在MPN診療中檢測意義

MPN疾病概況

骨髓增殖性腫瘤（MPN） 是以骨髓中一系或多系髓系（粒系、紅系、巨核系）細胞持續異常增殖為特徵的一組克隆性造血幹細胞疾病。2016版WHO將MPN分四類：

MPN伴嗜酸性細胞增多（MPN-Eo）、狹義的MPNs、系統性肥大細胞增生症（SM）和骨髓增生異常綜合徵/骨髓增殖性腫瘤（MDS/MPN）。

排除BCR-ABL為代表的慢性粒細胞白血病外

，

狹義的經典型MPNs包括：真性紅細胞增多症（polycythemia vera，PV），原發性血小板增多症（essential thrombocythemia, ET），原發性骨髓纖維化（primary myelofibrosis，PMF）

。

經典型MPNs的診療路徑

對於疑似MPN的患者，需進行病史、體檢和常規篩查，進一步開展多種專科檢查，例如骨髓塗片，染色體分析，免疫分型，骨髓活檢，RT-PCR，基因突變檢測等。對於ET、PV、PMF患者需要關注其危險度的分層。中國專家診療共識亦指出原發性骨髓纖維化的患者面臨一系列臨床問題，如貧血、脾臟腫大、體質性症狀、症狀性髓外造血等，儘早確認這些臨床問題並給予相應處理，非常必要。

經典型MPNs亞型的診斷離不開多種檢測的助力，尤其是骨髓病理和分子檢測技術。

參照WHO對PV、ET和MF的診斷標準，需滿足以下標準：

表1。 經典型MPNs的診斷標準

結合以上診斷標準，嘗試梳理經典型MPNs的診療路徑如下，其中

JAK2、CALR、MPL三個驅動基因的突變檢測對於MPN的分子診斷是非常必要的。

圖1。 經典型MPNs的診斷路徑

JAK2、MPL、CALR等驅動基因在MPN中的

檢測意義

JAK2，MPL，CARL基因突變均可引起JAK-STAT訊號通路異常啟用，被認為是BCR-ABL陰性MPN的驅動突變，賦予腫瘤細胞生存優勢。

圖2。 JAK-STAT訊號通路異常啟用

（引自

Mi-Ae Jang et。al。 Korean J Intern Med 2020；35（1）：1-11。

）

在超過90%的PV、約50%-60%的ET、PMF患者中均可以檢測到

JAK2 V617F突變

。在JAK2 V617F陰性患者中常可檢測到JAK2 Exon12上的突變；JAK2 V617F突變的等位基因負荷增高與高血紅蛋白水平、高白細胞水平、巨脾及血栓事件發生率增高等顯著相關，高負荷的PV及ET患者進展為白血病及繼發骨髓纖維化風險增高。

JAK2 Exon12突變

見於部分JAK2 V617F突變陰性的PV患者，突變型別以缺失突變、錯義突變等為主，最常見的有K539L、N542_543del、E543_544del。JAK2 Exon12突變的PV患者常表現出更高的血紅蛋白水平，血小板及白細胞計數較低，但兩者在血栓事件發生情況、骨髓纖維化轉化風險及死亡率方面無顯著差異。

文獻報道，67%~88%的JAK2突變陰性ET或PMF患者可檢出

CALR Exon9突變

，最常見的突變型別為L367fs*46（1型），和K385fs*47（2型），兩者在總的突變中分別佔45%和41% 。CALR突變陽性的PMF患者血小板計數更高，血紅蛋白水平更高，血栓發生率更低，總體生存期更長。

MPL基因常見突變

型別為W515L和W515K，W515A、W515S、W515R、S505N，可見於3%~5%的ET和8%~10%的PMF患者。攜帶MPL突變的ET患者表現為血小板水平增高，血紅蛋白水平較低，動脈血栓形成風險較高，總體生存時間較短。

除驅動突變外，MPN患者常能檢測到其它基因突變，如ASXL1、TET2、IDH1/2、TP53、EZH2等，這些基因突變在髓系腫瘤中均有不同頻率的報道，非MPN驅動特異性。MPN患者中常檢測到不止一種突變。隨著年齡的增長，部分基因突變在大於50歲的健康人群中也有出現和累積，出現克隆性造血。存在多種基因突變時， 細胞中的多種克隆突變相互作用， 疾病的表型和動態發展都展現出強烈的異質性。

因此，針對經典型MPNs患者，分子診斷中對JAK2、MPL、CALR等驅動基因突變的檢測最為必要；若條件允許，可對非驅動基因開展檢測。

邁劼康-邁傑轉化醫學針對經典型MPN的分子診斷產品

邁傑轉化醫學研發了人JAK2-V617F基因突變檢測試劑盒（熒光PCR法），商品名：邁劼康(註冊證編號：國械注準20213400222）

，用於臨床經典型MPN的輔助診斷，為國內JAK2 V617F檢測的首款三類試劑盒。

該檢測試劑盒採用擴增阻滯突變系統（ARMS-PCR）技術結合熒光探針檢測特異性擴增產物；附加錯配突變設計在3’端引物序列中，以特異性識別突變並擴增，透過識別擴增產生的熒光分子進行檢測，結果準確可靠。

圖3。 ARMS-PCR原理

該試劑盒具有以下檢測優勢：

靈敏：

最低檢測限低至10ng/25μl， 0。3%突變率（約9 copy/25uL的突變基因可被檢出）；

簡便：

檢測時間快，提取到結果只需3小時；

多平臺支援：

同時適用ABI 7500及宏石Slan兩種qPCR平臺。

操作流程：

參考文獻：

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