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EdU檢測怎麼做?

2022-11-21由 武漢伯遠生物 發表于 漁業

如何看懂流式細胞術的圖

伯遠醫學是武漢伯遠生物科技有限公司旗下全新開展的醫學服務平臺。伯遠生物成立於2011年7月26日,位於東湖高新技術開發區光谷生物城武漢生物技術研究院B8棟。伯遠生物專注於前沿分子生物學技術在生命科學研究和人類健康領域的應用和創新,致力於成為全球領先的基因科技產品和服務提供者。細胞增殖是生活細胞的重要生理功能之一,是生物體的重要生命特徵,是生物體生長、發育、繁殖以及遺傳的基礎。檢測細胞增殖的能力是評價細胞、代謝、生理、病理狀況、細胞活性、基因毒性等的重要指標之一。細胞增殖與多種因素有關,比如細胞代謝活性、與細胞增殖相關的蛋白表達、ATP的濃度等等。

背景說明

背景說明

基於DNA的合成原理,最初開發的工具是BrdU染色法,但其操作耗時長,往往需過夜處理細胞,操作繁雜,後來在BrdU的基礎上,開發出了革命性的探針——EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine),這是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴團在天然化合物中很少見,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶摻入正在複製的DNA分子中。基於EdU與Apollo熒光染料(綠色、橙色、紅色)的特異性反應,可直接快速、準確地檢測細胞DNA的複製活性。

EdU檢測怎麼做?

圖 BrdU與EduU檢測方法原理示意圖

服務流程

服務流程

體外實驗

客戶線上下單——訂單/實驗材料確認——細胞處理或組織切片——EdU孵育——固定、透化——EdU檢測——DAPI或Hoechst 33342或抗體標記(可選)——可選熒光顯微鏡或鐳射共聚焦顯微鏡鏡檢、流式細胞術分析——EdU陽性細胞計數——出具實驗報告——結果交付

體內實驗

客戶線上下單——訂單/實驗材料確認——體內直接注射EdU至相應組織——模型飼養——取相應組織進行組織切片——後續同體外實驗

注:體內注射EdU後,也可進行活體示蹤。

服務內容及說明

服務內容及說明

適用範圍

EdU廣泛應用於細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA損傷修復、病毒複製、細胞標記示蹤等方面的研究,尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的細胞增殖篩選實驗。

客戶下單及專案資訊填寫

在我司官網http://www。biorun。com/進行註冊或登入,請客戶按照頁面提示填寫專案名稱、選擇專案型別、填寫個人資訊及聯絡方式,提交專案所需要的具體資訊,包括:

1、細胞型別與名稱、模型種類與注射劑量;

2、檢測時間節點;

3、儘可能豐富的相關資料、文獻。

實驗資訊

實驗過程中客戶可以隨時登入管理系統檢視專案實時進展情況。實驗結題時系統會透過簡訊自動通知客戶,併發送實驗報告檢視網址。實驗結題後,實驗報告、檢測結果可線上檢視或列印,並永久保留。

實驗週期

致電詳詢

實驗交付內容

1、所有實驗的原始資料(包括實驗過程、實驗試劑與裝置等);

2、檢測報告與結果分析(EdU熒光圖、結果統計分析等);

3、具體實驗報告。

EdU的優點

1、更簡單:

無需抗原抗體反應,基於小分子化學反應的檢測方法簡單高效,反應僅需要幾分鐘;

2、更靈敏:

無需抗體,檢測染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴散,即便是單個增殖細胞也能準確檢測;

3、更快速:

無需過夜,省卻了抗原抗體反應的複雜繁瑣步驟,完成整個檢測週期僅需5h;

4、更準確:

無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷,確保細胞核邊緣清晰完整;

5、更相容:

對樣品幾乎無損傷,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記,能夠同時檢測細胞其他性狀特徵;

6、多種染料可選,適用於各種動物細胞檢測,對植物細胞亦適用。

文獻示例

文獻示例

EdU檢測怎麼做?

圖 Edu法檢測A549和PC9細胞的增殖情況(Yang et al。, 2021)

參考文獻

Cavanagh BL, Walker T, Norazit A, et al。 Thymidine analogues for tracking DNA synthesis。

Molecules

。 2011;16(9):7980-7993。

Qu S, Jiao Z, Lu G, et al。 PD-L1 lncRNA splice isoform promotes lung adenocarcinoma progression via enhancing c-Myc activity。

Genome Biol

。 2021 Apr 13;22(1):104。