逐典小課堂丨細胞消化知多少——胰蛋白酶的大用處
2022-09-26由 上海逐典生物 發表于 漁業
胰蛋白酶主要水解什麼
本期摘要:逐典Trypelectase重組胰蛋白酶和Tryplus消化液作為專注細胞消化領域的胰酶產品,專門為工藝和生產設計。
自實體組織分離是動物細胞的主要來源,目前生物製藥領域應用廣泛的細胞株如CHO細胞、293細胞、Vero細胞等最初均分離自不同動物的組織器官。那如何最有效分離出想要的單細胞呢?無論是原代細胞獲取還是成熟細胞株的消化傳代,細胞消化都是關鍵的一環,今天逐典給大家整理一篇細胞消化大全,方便您更好的選擇適合自己實驗的產品。
細胞消化在不同領域的應用
1. 原代細胞
直接從生物體獲取的組織更接近於生物體內的生活狀態,且生物性狀尚未發生很大改變,因此在藥物篩選、細胞移植、類器官培養、腫瘤研究等眾多領域備受歡迎。針對不同組織採用不同的消化酶能使解離過程更加高效,
酶解法也是主要的細胞解離方式,主要以胰蛋白酶為主,輔助新增其他蛋白酶增強活力。
2.細胞傳代
以單層生長的細胞彼此之間以及與培養皿發生蛋白質接觸,一般細胞長至80%-90%密度需要傳代消化,貼壁細胞傳代前,需要把細胞用消化試劑從培養容器表面解離出來,細胞得以分離成單個懸液傳代至含新鮮培養基的新容器內。
消化方法以酶解法為主,胰蛋白酶是最常用的解離試劑。
圖2。不同培養規模的細胞傳代
通常的細胞消化策略:
小規模的細胞收集可使用吹打或細胞刮刀
形成蛋白緊密連線的,可採用胰蛋白酶
上皮細胞等可表達鈣粘蛋白的細胞,在酶消化基礎上需新增EDTA等螯合劑
為了保持細胞活力,消化反應條件應與細胞接觸的強度相匹配。
如果將反應強度與細胞系的粘附特性相匹配,但細胞仍難以去除,則在生長培養基中可能存在抑制胰蛋白酶的元素,例如血清,可以透過在新增解離試劑之前用PBS簡單地衝洗細胞一次或兩次來克服。此外,形成特別強的多層細胞融合也是需要注意的。
毫無疑問,
胰蛋白酶
作為原代細胞獲取、細胞傳代消化中必不可少的原料之一,在生物製藥工藝中也是重要的生產原輔料。應用於生物製藥工藝意味著更高的質量標準,動物來源、藥典要求、生產級別、批間穩定性等都是胰蛋白酶產品的重要指標!
逐典Trypelectase重組胰蛋白酶和Tryplus消化液作為專注細胞消化領域的胰酶產品,專門為工藝和生產設計。
Trypelectase非動物源重組胰蛋白酶乾粉產品
,方便生產大規模配置,儲存、轉運更方便。還有高穩定性且即開即用的
TrypLUS消化液
,高封閉性滿足細胞消化領域的不同規模需求。
Trypelectase重組胰蛋白酶特點
符合藥典中重組胰蛋白酶的相關標準
生產裝置和生產環境符合相關法規要求,生產過程完全符合GMP指導原則
重組生產,生產過程部使用任何動物來源原料,無外源性病毒汙染,使用安全
批次生產,可以保證穩定連續的批次生產,產品批次間無差異,質量穩定
純度高,不含雜酶,宿主蛋白和宿主細胞DNA殘留量符合藥典標準
TrypLUS消化液特點
純度高,酶切特異性好,減少多種酶裂解造成的細胞損傷
2-8℃可穩定儲存24個月,室溫也可穩定放置,節省冰箱儲存空間
直接替代胰蛋白酶消化流程,培養基稀釋即可,無需酶活抑制劑
沒有動物來源成分,極大程度上減少外來汙染
應用範圍廣,適合有血清或無血清環境的細胞消化
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