從分子、免疫及預後視角分析EGFR陽性NSCLC患者群體的異質性

研究背景

肺癌是一種由多種與臨床相關的分子型別和組織學型別組成的複雜疾病。在美國，15%的肺腺癌患者中檢測到

EGFR

突變，最常見的突變發生在外顯子19和外顯子21

［1， 2］

然而中國肺癌患者群體中

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突變的比例與其他地區有很大差異。既往文獻報道

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不同位點突變可能與酪氨酸激酶抑制劑（TKI）以及免疫檢查點抑制劑（ICIs）的療效相關，因此有必要對

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不同位點突變進行細化分析。此外，腫瘤免疫微環境（TIME）在腫瘤進化中也發揮重要作用。越來越多的研究表明癌細胞與TIME的成分密切相互作用，TIME的特性也會影響腫瘤對免疫治療的響應。有個別研究報道了在驅動基因陽性的NSCLC患者中嘗試免疫檢查點抑制劑（ICI）的適用性，這些研究提示，某些

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突變亞型的NSCLC患者群體可能具有ICI適用的潛力。此外TIME中的成分（如CD8+T細胞）在幾類腫瘤中的預後意義也已被報道

［3， 4］

。在適應性免疫細胞中，腫瘤浸潤淋巴細胞（TILs）也已被廣泛探索

［5］

。既往諸多研究證據提示，特定腫瘤微環境的成分和特徵可被視為預測性生物標誌物，並在一定程度上為ICI的潛在應用提供依據。因此，從分子、免疫以及預後視角分析我國EGFR陽性NSCLC患者群體的異質性具有重要意義。

昆明醫科大學第一附屬醫院、昆明市安寧市第一人民醫院的專家團隊與思路迪診斷聯手協作，針對上述問題進行了探索，嘗試揭示具有不同EGFR突變的NSCLC的腫瘤分子突變特徵和免疫學格局。現在，該研究已經見刊於Frontiers in Immunology（IF=8.786）雜誌。

中國人群EGFR突變比例

本研究透過分析9649名中國原發性 NSCLC 患者的資料來計算不同

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突變亞型的確切比例。如圖1B中的餅圖所示，51。3% 的中國 NSCLC 患者中檢測到

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突變。我們也評估了原發性 NSCLC患者中不同亞型的

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突變（圖 1C），發現腺癌中的

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突變多於鱗狀細胞癌和大細胞癌（圖 1D）。此外，我們還將研究中幾種

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突變的頻率與前瞻性 MSKCC 佇列中的頻率進行了比較

［6］

。

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不同突變亞組

NSCLC具有不同免疫微環境特徵

接下來，團隊分析對比了

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不同突變亞組的NSCLC腫瘤免疫微環境特徵，以期為ICI在不同亞組中適用ICI治療的可能性提供理論依據。我們評估了有和沒有

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突變的腫瘤之間免疫細胞浸潤的差異。在CD8+T細胞、M1 （CD68+HLA-DR+） 腫瘤相關巨噬細胞 （TAMs）、M2 TAMs （CD68+HLA-DR-）、CD56bright NK 細胞和 CD56dim NK細胞中，相較無

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突變組，

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突變組中發現腫瘤實質中較少的CD8+ T細胞浸潤 （p<0。05）。在腫瘤實質中，與沒有

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突變的組相比，只有19del 組顯示出較少的浸潤CD8+ T細胞（p<0。05）（圖 2D）。對於某些

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突變亞型，發現腫瘤實質、間質和腫瘤實質+間質中CD8+ T細胞的數量存在差異，例如，與19del和S768I組相比，在

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G719A/C/S 突變組中發現腫瘤中更多的CD8+ T細胞浸潤（圖2D）。

對於有和沒有 EGFR 突變的患者

預後生物標誌物也不同

為了探索NSCLC的預後生物標誌物，我們對98名術後NSCLC患者進行了隨訪。這些患者根據有無

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突變 （

EGFR-/+

）、TMB水平、免疫細胞進行分層，免疫細胞包括 CD8+ T 細胞、M1/M2 巨噬細胞、CD56bright 和 CD56dim NK 細胞等等。透過使用腫瘤浸潤性免疫細胞的中位密度值為cutoff進行Log rank PFS分析分析。如 CD8+ T-high 定義為所有患者中排序為腫瘤中CD8+ T 細胞密度中位值以上的患者，否則定義為 CD8+ T-low。根據結果，EGFR突變（圖3A-5B）、TMB水平（圖3C）、TIME成分（圖3D-3H）中，僅CD8+ T細胞與NSCLC不同的預後相關。具體而言，較長的 PFS與CD8+ T-high相關（p<0。01）（圖 3D）。

我們進一步分析了 TIME 在有和沒有

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突變的 NSCLC 患者中的潛在預後意義，並確定了在

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突變與否的患者中不同的預後生物標誌物（圖 4A-J）。僅在沒有EGFR突變的患者中觀察到 CD8+ T 細胞的預後意義（p<0。05）（圖 4A）；而對於

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突變的患者，發現CD56dim NK-high組的PFS比CD56dim NK-low組更長（p<0。05）（圖 4J）。因此，

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突變和

EGFR

野生型的NSCLC患者具有不同的預後生物標誌物。

總結與延伸

綜觀本次研究，

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陽性NSCLC是一種複雜的疾病，研究顯示了該類患者群體的遺傳和免疫學異質性以及預後的差異。這些結果表明，具有不同

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突變的NSCLC患者在臨床實踐中應進行不同的治療和管理。對於

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陽性的NSCLC患者，也不能排除 ICI治療。當然本研究結果還需深入證明，尤其是需要干預性研究的證實。

本研究使用了思路迪診斷的TIME Pro檢測服務進行免疫微環境分析。這是一種mIHC檢測，可在一張組織切片上實現針對多種不同生物標誌物的染色標記，由於採用了新一代技術，相較於市面上流行的前代五標六色技術，TIME Pro最多可以達到六標七色，即一張組織片中可標記6個marker，加上染色細胞核的DAPI呈現藍色，合計7種顏色，做到了對有限組織樣本的充分利用。下圖即為本次研究中所涉及的部分染色效果。

TIME Pro在進行mIHC染色過程中所使用的抗體全部來自Abcam、CST、安捷倫等國際知名抗體供應商，保證了染色效果的穩定可信。所使用的掃描裝置則為第三代全自動掃描器，相較於前代產品，無需人工干預，杜絕了人為誤差；新一代的掃描裝置還具備多光譜訊號拆分技術，確保了掃描後圖像的高質量，最大程度避免串色；最後，在進行定量定位分析時，還應用了人工智慧演算法，能夠根據特徵識別組織區域，進而對全景圖進行自動分割、分類、計算，這使得計算結果更加精確，可重複性高。TIME Pro可以說是臨床科研中的得力助手。