槓柳甙元的提取方法

景及概述

［1］

槓柳甙元即槓柳苷元，槓柳苷元有強心和抗腫瘤等藥理作用。據中華醫學雜誌［J］。1956，7：651李章文等《槓柳皮（北五加皮）的強心作用》一文報道，槓柳苷元也有強心作用，而且起效迅速，蓄積性小。據中草藥［J］。2006，37（4）：519陳書紅等《香加皮的抗腫瘤活性成分研究（I）》一文中報道：槓柳苷元對MCF-7腫瘤細胞增殖有很強的抑制作用。

槓柳苷元為強心苷元，不僅具有強心作用，還具有抗炎、抗腫瘤等藥理作用。顧為等發表的“槓柳苷元對肥大細胞脫顆粒及釋放組胺影響的研究”和韓宇博等發表的“槓柳苷元的抗腫瘤作用研究”都對槓柳苷元做了實驗驗證。

槓柳苷元在中藥香加皮中含量較低，製備難度較大，多是以槓柳毒苷為原料水解得來。

製備

［1-2］

報道一、

槓柳甙元的製備方法，其工藝步驟為：

（1）取香加皮提取物100克，用pH為3的鹽酸水溶液與等體積的氯仿混合溶液進行酸水解，時間為1小時，溫度為80℃。

（2）水解完畢分出氯仿層，濃縮乾燥得到中間體A。

（3）將中間體A進行柱層析，柱填料為矽膠，採用梯度洗脫，洗脫劑為10∶0～10的乙酸乙酯—甲醇混合溶液；收集含有槓柳苷元的餾分，濃縮乾燥後得到中間體B；

（4）將中間體B用乙醇進行重結晶，得到槓柳甙元結晶1。7克，收率為1。7％。

報道二、

香加皮藥材粉碎，取1000g，加入8L90%甲醇溶液超聲提取60min，濾過液體再加3L90%甲醇超聲提取30min，合併提取液回收甲醇，加500ml蒸餾水共沸1小時，加適量矽藻土趁熱離心，收集離心液，檸檬酸調節pH4。5，加熱至50℃，加入1g蝸牛酶保溫酶解32小時，酶解液減壓濃縮，離心得粗品12g。取氯仿、甲醇、水按4：3：3比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速800r/min，注入流動相，平衡後，調整流速2ml/min，氯仿溶解粗品，進樣，透過檢測儀定時收集流分，流分回收試劑乾燥，連續製備，得槓柳甙元6。2g，含量96。6%。

抗癌機制

［3-4］

李世堅等人分析了中藥香加皮槓柳甙元誘導人鼻咽癌CNE2細胞凋亡及其作用機制。方法應用CellTiterGlo發光法檢測槓柳甙元對鼻咽癌CNE2細胞增殖的影響，並計算其半數抑制濃度（IC50）；採用熒光定量PCR檢測經槓柳甙元處理後細胞凋亡相關基因mRNA表達的改變；採用Western blot法檢測相應蛋白酶活性變化。結果 （1）在一定濃度範圍內，隨槓柳甙元濃度升高，對CNE2細胞增殖的抑制作用增加；槓柳苷元作用於CNE2細胞在48 h的IC50為1。712μmol/L。（2）槓柳苷元濃度為1μmol/L的caspase-3 mRNA表達量少量上升作用不明顯、2μmol/L的caspase-3 mRNA表達量上升，有一定的作用（P<0。05）。而濃度為4μmol/L的caspase-3 mRNA表達量顯著上調，差異顯著（P<0。01）。與對照組相比，不同濃度下槓柳甙元的EGFR mRNA的表達量影響結果無統計學意義。（3）槓柳甙元處理CNE2細胞48 h後， 槓柳甙元組的caspase-3蛋白酶的表達水平較對照組顯著上調（P<0。01）；EGFR蛋白酶表達量與對照組相比差異不大（P> 0。05）。結論槓柳甙元可明顯抑制鼻咽癌細胞的增殖，其機制可能為透過上調凋亡基因caspase-3及其蛋白酶的表達而誘導細胞凋亡

韓宇博等人研究了中藥香加皮提取單體化合物槓柳甙元對體外培養S180、SGC-7901、A549、LOVO、MCF-7、Hep G2腫瘤細胞株的毒性作用，探討槓柳甙元對荷瘤模型小鼠的抗腫瘤作用。方法四氮唑鹽（MTT）法測定槓柳甙元對體外培養腫瘤細胞的毒性作用，移植性荷瘤動物模型評價槓柳甙元對整體動物的抗腫瘤作用。結果槓柳甙元對體外培養腫瘤細胞的毒性作用顯著，對常見腫瘤細胞株的個數抑制濃度介於（0。461。50）μg/mL；荷瘤模型動物給予槓柳苷元10。0 mg/kg劑量時，S180實體瘤抑瘤率達到51。0%±17。0%，使荷腹水瘤小鼠存活時間延長94。2±13。1%，與臨床常用抗腫瘤藥物FU相當（P>0。05）；抗腫瘤作用有明顯的劑量依賴關係；部分受試動物給藥後出現食慾減退、脫毛、抗拒等不良反應，未見死亡。結論槓柳甙元有顯著的抗腫瘤作用，同時也有一定的不良反應，其潛在開發價值有待進一步研究評價。

參考文獻

［1］［中國發明］CN200610013621。9一種槓柳苷元的製備方法

［2］［中國發明］CN201110210631。2一種酶法水解制備槓柳苷元的方法

［3］李世堅，焦愛軍。槓柳苷元誘導鼻咽癌細胞凋亡及其作用機制的研究［J］。臨床合理用藥雜誌，2021，14（17）：30-32+35。DOI：10。15887/j。cnki。13-1389/r。2021。17。011。

［4］韓宇博，趙愛國。槓柳苷元的抗腫瘤作用研究［J］。中國小兒血液與腫瘤雜誌，2008（01）：1-5