DNA提取技術乾貨篇：血漿DNA與血漿遊離DNA提取試劑的選擇方法

今天給大家分享一下DNA提取技術乾貨

，目前主流的幾款血漿遊離DNA提取試劑，現在液體活檢已經成為醫學檢驗的一個趨勢，而各種疾病篩查成為現在研究的熱點。接下來大家就跟小編一起來了解一下吧。

血漿DNA與血漿遊離DNA提取試劑的選擇方法

血漿DNA

，又稱血液迴圈DNA、

遊離DNA

，是指血液中游離於細胞外的DNA，其來源主要有三：白細胞崩解釋放的DNA、壞死組織特別是腫瘤組織釋放入血液的DNA和感染病毒、細菌的DNA。

近幾年來，隨著基因診斷技術的發展，遊離DNA的應用價值越來越大，如優生篩查、腫瘤早期診斷、遺傳病檢測和病原體感染基因檢測等。但血液中游離DNA含量一般較低，片段較小，不易提取，這大大影響了遊離核酸的基因檢測和各種研究的開展。

遊離DNA

提取方法一般有TRizol方法、離心柱法、磁珠法。其中，Trizol方法與離心柱相比，提取效果相當，但是因其對操作者帶來的毒性，現在越來越被棄用。磁珠法比較適合機器自動化提取，如果沒有核酸提取儀，只是使用磁力架配套提取，磁珠法的操作就比較麻煩且容易導致樣本交叉汙染。另外，根據研究，磁珠法的核酸提取得率不如離心柱法。如果要提取的遊離核酸的量比較低，最好選擇離心柱法。對於遊離DNA含量較低的樣本或比較珍貴的樣本或樣本總數不是很多的實驗室，首選的核酸提取方法應是離心柱法。

離心柱法遊離DNA提取原理主要是樣本裂解後，

遊離DNA

在高鹽條件下與矽膠膜結合，再在低鹽、高PH值時將DNA從矽膠膜上洗脫下來。面對各種品牌的離心柱法提取試劑盒，哪種才是最適合的呢？目前國內常用的離心柱法遊離DNA提取試劑盒有國內品牌Biog、國際品牌Q、國內品牌T等。我們以下就幾種遊離DNA提取試劑盒進行比較。

一、有較高的提取得率。

DNA核酸提取

得率的確定，常用的是使用紫外分光光度計的方法。但是，血清、

血漿dna

樣本中游離核酸含量較低，如果直接用紫外法檢測，得出的數值並不準確，而且多次測量的結果會變異很大。關於提取得率，Qiagen的研究資料是1ml正常血漿樣本cfDNA得為7。35ng左右，但如果白細胞大量凋亡，血漿中的遊離DNA量會有所增加，腫瘤病人的血漿DNA會大幅增加。

有些研究者提取血漿DNA後習慣於先用紫外檢測濃度，發現紫外檢測不出來或濃度很低時便認為提取失敗，放棄後面進一步的實驗，其實並不可取。我們可以把紫外讀數作為參考，但是不能作為判斷得率的唯一標準，最好還是要做個PCR或熒光定量。

根據Qiagen公司的實驗，血清血漿的量與

DNA提取

的核酸量成正比。因而，如果要提高核酸得率，可透過增加血清或血漿的量來實現。一般地，做血漿或血清核酸提取，樣本量最好在1ml以上。如果1ml或更大量樣本得不到滿意的檢測結果，則應及時考慮更換提取試劑盒。

目前國內常用的

DNA提取

提取試劑有國際品牌Q、國內品牌T、國產品牌Biog等，我們實驗室使用下來，Biog的核酸提取得率較高，1ml肺癌病人血漿DNA得率在85ng左右，Q的得率在72ng左右，T的得率在63ng左右，基本上都能滿足下游PCR實驗的需求。當然，如此低的濃度直接測OD值不太容易，如果使用Nanodrop2000c，其檢測下限為2ng/ul。如洗脫液為30ul，則需要1ml左右的血漿才能檢測出來。顯然，如果是健康人的血漿，1ml血漿的DNA濃度更低，紫外可能根本就檢測不出來。因而，血漿DNA提取完成以後，最好直接做PCR，紫外檢測的意義不大。

二、提取的核酸純度高。

核酸純度一般根據OD260/OD280比值來判斷。一般說來，試劑盒

DNA提取

的DNA 其OD260/OD280比值應在1。6——1。8之間。如果提取的DNA溶液OD260/OD280比值小於1。6，通常說明有蛋白質或酚、多糖等的汙染。如果提取的DNA溶液OD260/OD280>1。9，則表明有RNA汙染。

使用Q公司血漿DNA提取試劑盒提取的血漿DNA， OD260/OD280一般在1。7-1。9之間；使用Biog血漿遊離DNA提取試劑盒提取的血漿DNA， OD260/OD280一般在1。6-1。9之間，使用T公司血漿DNA提取試劑盒提取的血漿DNA OD260/OD280比值也在1。6-1。9之間。Q公司提取DNA的純度似乎優於國產試劑，但我們提取的DNA是用於PCR檢測，結果並無明顯影響。可能因為Biog公司血漿遊離DNA提取試劑盒提取的血漿DNA得率較高的原因，同樣的DNA加樣體積（2ul），Biog試劑盒提取的DNA 熒光定量PCR檢測結果CT值要優於Q公司試劑盒提取的DNA。

三、操作簡便性。

操作簡便性也是

血漿DNA

提取試劑選擇的一個重要因素。操作過於複雜，不僅費時費力，還容易導致樣本間的交叉汙染，也容易損失樣本。特別是用於臨床檢測或樣本較多情況下的檢測，操作複雜如果導致交叉汙染會引起誤診，還會影響出檢測報告的時間。因而，選用操作簡便、流暢的提取試劑盒非常重要。

就我們曾經用過的以上三種提取試劑盒來說，Q公司的

血漿DNA提取

試劑盒提取過程大約30min，從樣本處理開始需要個10步驟； T公司血清/血漿遊離DNA提取試劑盒整個提取過程需要約40min，從樣本開始處理10個步驟；B公司的Biog血漿遊離DNA提取試劑盒提取過程大約25min，從樣本開始處理8個步驟，Biog公司的血漿遊離DNA提取試劑盒在操作簡便性上具有一定優勢，更適合於較多樣本的檢測。據瞭解，該產品已透過藥監局備案，也更適合臨床樣本的檢測。

綜合看來，與國外知名品牌相比，國產試劑盒在

血漿DNA

提取純度上稍有不足，但在提取得率和操作簡便性上基本沒有區別，有些品牌還略有優勢，可根據實驗需求進行選擇。對純度要求較高的實驗，可選擇Q等國外知名品牌，如果對提取量要求較高或提取後主要進行PCR或分子雜交之類的實驗，可考慮選擇Biog等國產品牌。

文章摘自：搜狐網

原作者：優易信網路