Morris水迷宮實驗評估改善AD神經元和神經元和樹突損傷的機制

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目的

觀察淫羊藿苷對 AD 模型大鼠 Ras 同源基因家族成員 A（RhoA）/Rho 相關捲曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK） 訊號通路的作用，並探討其改善神經元和樹突損傷的作用機制。

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儀器

XR-XM101 型 Morris 水迷宮（上海欣軟資訊科技有限公司）

；LRH-70 型生化培養箱（上海一恆科學儀 器有限公司）；71000 型大小鼠腦立體定向儀（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；KD-BM 型組織包埋機和 KD-2260 型石蠟切片機（浙江金華市科迪儀器裝置有限公司）；Bioptic Qsep100 型核酸蛋白分析儀（江蘇光鼎生物科技有限公司）；LC480 型熒光定量 PCR 儀（瑞士 Roche 公司）；SVE-2 型垂直電泳儀及電源（武漢 Servicebio 公司）；Tanon 1600 型全自動數碼凝膠影象分析系統（上海天能科技有限公司）；BX43 型正置光 學顯微鏡（日本 Olympus 公司）。

Morris水迷宮，型號：XR-XM101

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動物分組及造模

將 SD 大鼠隨機分為正常組和造模組，其中正常組 15 只，造模組 65 只。參考之前的文獻報道［9］製備 Aβ1-42 懸浮液：用二甲亞基藍（DMSO）和無菌生理鹽水的混合液將 Aβ1-42 稀釋成 2。5 g·L-1 的混懸液，置 37 ℃恆溫 孵育 1 周。參考文獻製備［10］AD 模型：用 4%水合氯醛溶液經腹腔注射麻醉大鼠（400 mg·kg-1），解剖頭部皮 毛，並將其固定於腦立體定位儀。依據大鼠腦立體定點陣圖譜，於囟門後 0。9 mn，矢狀線左/右側 1。5 mm 處鑽 深為 4。0 mm 的圓孔（AP=0。9， L/R=1。5，V=4。0），鑽孔後，使用微量進樣器向大鼠雙側側腦室勻速注射 Aβ1-42 懸浮液各 2 μL，注射速度為 0。5 μL·min-1，留針 5 min，退針，縫合皮毛。

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給藥

造模 1 周後，應用 Morris 水迷宮實驗篩選出認知損傷大鼠 60 只。將 60 只認知損傷大鼠隨機分為模型組， 淫羊藿苷低、中、高劑量組，另將正常大鼠設為空白組，每組 15 只。參考文獻［9-10］確定淫羊藿苷組的給藥 劑量，即淫羊藿苷低、中、高劑量組分別按 0。03、0。06、0。09 g·kg-1 的劑量灌胃淫羊藿苷配置的溶液。空白組 和模型組則按 10 mL·kg-1 的劑量灌胃等體積的生理鹽水。5 組連續灌胃 4 周，1 次/d。

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Morris 水迷宮實驗

治療結束後，採用 Morris 水迷宮實驗檢測大鼠的認知功能。正式測試前，連續進行 5 d 的學習記憶訓練。 訓練結束後進行定位航行實驗和空間探查實驗，其中定位航行實驗統計大鼠的逃避潛伏期，空間探查實驗則。 統計大鼠的穿越平臺次數、目標象限駐留時間及平均游泳速度。

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結論

本研究首先透過尼氏染色和高爾基染色對 AD 模型大鼠神經元和樹突進行檢測，結果發現， 模型組大鼠海馬 CA1 區神經元數量、樹突棘密度和樹突長度較空白組明顯減少，而淫羊藿苷中、高劑量組大 鼠海馬 CA1 區神經元數量、樹突棘密度和樹突長度較模型組增加，這說明淫羊藿苷可以改善 Aβ1-42 誘導的神 經元和樹突損傷。此外，課題組還檢測了腦內促炎性因子 TNF-α、IL-1β、IL-6 的 mRNA 和蛋白表達水平， 結果證實淫羊藿苷中、高劑量組大鼠海馬中 TNF-α、IL-1β、IL-6 的 mRNA 和蛋白表達水平較模型組下調， 這說明淫羊藿苷可抑制 Aβ1-42 誘導神經炎症。綜合分析上述實驗結果，課題組認為淫羊藿苷可透過抑制神經 炎症改善 AD 神經元和樹突損傷。