硝酸還原酶（NR）檢測試劑盒（活體微板法）

硝酸還原酶（NR）檢測試劑盒(活體微板法）

產品貨號：

BA173

6

產品規格：

100T

產品簡介：

NR

（

EC1。7。1。3

）廣泛存在於植物中，是植物硝態氮轉化為氨態氮的關鍵酶，也是誘導酶，對作物的產量和品質有影響。

NR

催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，

NO3

-

+NADH+H

＋→

NO2

-

+NAD

＋

+H

2

O

，

NADH

在

340nm

下有特徵吸收峰，

340nm

下吸光值的變化即可表示酶活

。

主要用於檢測植物樣本、血清等中硝酸還原酶活性，尤其適用於植物體內硝酸還原酶的活力，用活體樣品直接反應，然後測反應液的酶活性。

產品組成：

操作步驟：

1。

標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔

10

孔，在第

1

、第二孔中分別加標準品

100μl

，然後在第

1

、第二孔中加標準品稀釋液

50μl

，混勻；然後從第

1

孔、第二孔中各取

100μl

分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液

50μl

，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取

50μl

棄掉，再各取

50μl

分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液

50ul

，混勻；混勻後從第五、第六孔中各取

50μl

分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液

50μl

，混勻後從第七、第八孔中分別取

50μl

加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液

50μl

，混勻後從第九第十孔中各取

50μl

棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為

50μl

，濃度分別為

1800ng/L

，

1200ng/L

，

600ng/L

，

300ng/L

，

150ng/L

）。

2。

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液

40μl

，然後再加待測樣品

10μl

（樣品

最

終稀釋度為

5

倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3。

溫育：用封板膜封板後置

37℃

溫育

30

分鐘。

4。

配液：將

30

（

48T

的

20

倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水

30

（

48T

的

20

倍）倍稀釋後備用。

5。

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置

30

秒後棄去，如此重複

5

次，拍幹。

6。

加酶：每孔加入酶標試劑

50μl

，空白孔除外。

7。

溫育：操作同

3

。

8。

洗滌：操作同

5

。

9。

顯色：每孔先加入顯色劑

A50μl

，再加入顯色劑

B50μl

，輕輕震盪混勻，

37℃

避光顯色

15

分鐘

。

10。

終止：每孔加終止液

50μl

，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11。

測定：以空白

孔

調零，

450nm

波長依序測量各孔的吸光度（

OD

值）。 測定應在加終止液後

38

分鐘以內進行。

計算

：

以標準物的濃度為橫座標，

OD

值為縱座標，在座標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD

值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與

OD

值計算出標準曲線的直線迴歸方程式，將樣品的

OD

值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度

。

注意事項：

活體法步驟簡單，適合快速、多樣本的測定。離體法操作相對複雜，但重複性好。

想了解更多精彩內容，快來關注尚寶生物