完美生科院積極探索健康食品中多糖檢測技術，為完美產品保駕護航

多糖，是健康食品中一種常見的有效成分，具有免疫調節、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、降血壓、抗血栓、降血糖、抗輻射以及保護免疫性肝損傷等功效。

在生產過程中，常需對多糖的含量進行測量和監控。但由於多糖不是一種純粹的化學物質，而是由10個以上相同或不同種類的單糖縮合而成的聚合糖高分子碳水化合物，可用通式（C6H10O5）n表示。在形成多糖的過程中，由於單糖的種類、個數、連線方式等的區別，導致多糖存在形式多變、種類繁多，因此很難採用液相色譜法或氣相色譜法測定其含量。

那多糖比較常用的檢測方法有哪些呢？這些常用的方法存在哪些問題？下面完美公司就給大家一一道來，多糖檢測技術是如何為完美產品保駕護航的！

目前常用的檢測方法

苯酚-硫酸法

在多糖的定量分析中，苯酚-硫酸法是被廣泛應用的方法之一。如NY/T 1676-2008、SN/T 4260-2015、QB/T 5176-2017、GB/T 18672-2014、GB/T 40632-2021、DB45/T 2143-2020、DB22/T 2274-2015、DB22/T 1685-2012及2020年版《中國藥典》項下鐵皮石斛、金櫻子和枸杞子等標準中多糖的測定均為苯酚-硫酸法。

其原理是多糖在濃硫酸作用下水解成單糖並迅速脫水生成糠醛衍生物，與苯酚縮合成橙黃色化合物，以葡萄糖等為標準品，用紫外分光光度計測定吸光度值與糖濃度的線性關係，進而對樣品進行定量。

該方法操作簡單、快速，顯色後穩定性較好，但存在有時測定結果精密度較差、標準曲線的R2偏低和有色樣品結果易偏高等問題，相關原因及解決方法見表1。

表1 苯酚-硫酸法易出現的問題及解決方法

蒽酮-硫酸法

DB12/T 884-2019及2020年版《中國藥典》項下百合、靈芝及黃精等標準中多糖的測定均為蒽酮-硫酸法。

其原理是多糖在濃硫酸作用下水解成單糖並迅速脫水生成羥甲基呋喃甲醛（羥甲基糠醛），與蒽酮縮合成藍綠色化合物，以葡萄糖等為標準品，用紫外分光光度計測定吸光度值與糖濃度的線性關係，進而對樣品進行定量。

該法幾乎可以測定所有的碳水化合物，但顯色時樣液的取樣體積、蒽酮試劑中硫酸的濃度、蒽酮試劑的用量、沸水中反應的時間這幾個操作條件之間是有聯絡的，且顯色後顏色的深淺隨溫度條件和加熱時間而變化，因此，該方法的重複性及穩定性較差。

若採用此法測定多糖含量，控制反應條件很重要，否則會影響分析結果，且蒽酮試劑宜新鮮配製。此外，樣品中若色氨酸含量較高，對顯色反應會有一定的干擾。

鹼性酒石酸銅滴定法

該法的原理是樣品中的多糖經酸解後，全部轉化成還原性單糖，在加熱條件下直接滴定標定過的鹼性酒石酸銅液，以亞甲藍為指示劑，根據樣品液消耗的體積計算還原糖含量，再乘以換算係數0。9即得多糖含量。

使用該方法時需注意以下幾點：

1。亞甲藍被糖還原為無色時即為滴定終點，但與空氣接觸後又被氧化為藍色，因此一定要保持在微沸狀態下（防止空氣進入）滴定。

如可在加熱板的一邊放置石棉網，開啟加熱板，設定為最高溫度，先將待滴定的錐形瓶放置在加熱板上未放石棉網的一邊迅速加熱至沸（可在錐形瓶上蓋上坩堝蓋），再將錐形瓶移至另一邊有石棉網的加熱板上繼續加熱，以保證滴定時每個樣品的熱源強度儘可能一致，且便於終點的判斷。

2。為了減少實驗誤差，除了熱源強度外，錐形瓶的規格（如統一選用150mL的錐形瓶）、加熱時間、滴定速度、終點判斷等也應儘可能一致。

3。標定時，加熱至沸後，葡萄糖對照品溶液的用量必須控制在0。5～1。0mL之間，平行滴定的體積差不超過0。1mL，否則應重複滴定。

4。當健康食品中多糖含量太低或水解後溶液顏色太深影響終點觀察時，可採用回滴法。但在正式滴定前，一定要進行預測，以確定加入葡萄糖溶液的量。

正式滴定時，需將滴定所需體積的絕大部分先加入鹼性酒石酸銅溶液中共沸，使其充分反應，僅留1mL左右作為滴定終點的判斷。

多糖檢測應注意的問題

上述幾個方法是目前常用的測定健康食品中多糖的方法，但是容易存在以下幾個問題：

取樣

健康食品大多為膠囊，內容物呈粉狀或顆粒狀，所以取樣時至少要取20粒樣品，全部倒出後混勻，內容物為顆粒狀時，應研磨成細粉，再用標準篩篩取，保證樣品均勻、具有代表性，使結果更精確。

樣品中有無澱粉、糊精的判定

若樣品中含有澱粉或糊精等物質，這些物質也會水解成多糖，從而使多糖檢測結果偏高。因此若不能確定樣品中是否含有澱粉或糊精，在預處理過程中，可用碘液檢驗，觀察樣液是否與碘溶液反應而呈現藍色或紅色。

若顯藍色則應加入α-澱粉酶及糖化酶處理，若顯紅色則應加入糖化酶處理。處理的原則是將這類非活性多糖的碳水化合物全部酶解，再用乙醇沉澱所需要的活性多糖以達到分離的目的。

脂肪的影響

脂肪的存在會妨礙酶對澱粉的作用及可溶性糖類的去除，因此應用乙醚脫脂，如樣品中脂肪含量較少，則可省略此步。

方法的選擇

一般來說，比色法的優點是靈敏度高（可達μg/mL），樣品用量少，但缺點是測定時常使用葡萄糖做對照品，誤差較大，理論上需用被測物的純品作對照品，但製備被測物的純品並非每個實驗室都能做到，且健康食品又由多種中草藥製成，多糖種類不一，更增加了獲得純品的難度。

所以當成品中多糖含量大於1%（質量濃度）時，最好選用鹼性酒石酸銅滴定法；不過在能獲得樣品中所含多糖的純品作對照品時，可用色譜法進行分離檢測。

隨著健康食品市場的擴大，對於多糖的關注度也越來越高，但是由於多糖成分複雜、結構多樣化，如何尋得一個比較合理、覆蓋範圍較廣的方法是值得深入研究和探索的課題。歡迎專家同行與完美公司進行指導交流。