食品微生物檢驗副溶血性弧菌檢驗常用培養基原理解析

3%氯化鈉鹼性蛋白腖水

蛋白腖提供碳源、氮源、維生素、生長因子；高含量氯化鈉和高pH值可以抑制非弧菌類細菌生長，不影響副溶血性弧菌生長。

硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂

配方中多價蛋白腖、酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長因子；氯化鈉可刺激弧菌的生長；蔗糖是可發酵的糖類；膽酸鈉、牛膽汁粉、硫代硫酸鈉和檸檬酸鈉及較高的pH可抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群；硫代硫酸鈉與檸檬酸鐵反應作為檢測硫化氫產生的指示劑；溴麝香草酚藍和麝香草酚藍是pH指示劑；瓊脂是培養基的凝固劑 。

副溶血性弧菌不發酵蔗糖，不會使培養基pH降低，因而在該培養基上為綠色菌落，創傷和擬態弧菌都不發酵蔗糖，需進一步確證鑑定，霍亂弧菌發酵蔗糖為黃色。

副溶血性弧菌為綠色菌落

弧菌顯色培養基

配方中蛋白腖和酵母膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源；蔗糖為可發酵的糖類；抑菌劑抑制大部分非弧菌細菌，氯化鈉可維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑；混合色素與副溶血性弧菌、霍亂弧菌和創傷弧菌所對應的酶發生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上產生品紅色菌落（副溶血性弧菌）和綠-藍綠色的菌落（霍亂弧菌和創傷弧菌）。

副溶血性弧菌為品（紫）紅色菌落

3％氯化鈉胰蛋白腖大豆瓊脂

胰蛋白腖、大豆蛋白腖提供氮源、維生素、生長因子；高含量氯化鈉可以抑制非弧菌類細菌生長，不影響副溶血性弧菌生長；瓊脂為凝固劑。

氧化酶試驗

原理：氧化酶使細胞色素C氧化，氧化型細胞色素C再氧化對苯二胺試劑形成紫色複合物，產生顏色反應。

操作：滴加1滴氧化酶試劑到一小塊潔淨濾紙上，用玻棒或接種環（鉑或塑膠）挑取適量新鮮菌苔塗在試劑潤溼的紙片上；30秒內出現藍紫色為陽性，延遲反應或無顏色變化為陰性。

3％氯化鈉三糖鐵瓊脂

蛋白腖、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質；乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發酵糖類，其產酸時透過酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，鹼性呈紅色；硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵；較高含量的氯化鈉維持弧菌均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑。

副溶血性弧菌在3％氯化鈉三糖鐵瓊脂上的特徵

嗜鹽性試驗

挑取純培養的單個可疑菌落，分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰腖水，36℃±1℃培養24 h，觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰腖水中不生長或微弱生長，在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰腖水中生長旺盛。

賴氨酸脫羧酶試驗培養基

具有氨基酸脫羧酶的細菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺（賴氨酸→屍胺）和二氧化碳，使培養基變鹼，使指示劑顯示出來。

結果判讀：陽性為試驗管為綠色-藍綠色，對照管變黃色； 陰性為試驗管和對照管均變黃色，或均不變色。

3%氯化鈉甘露醇發酵試驗

絕大多數細菌利用糖（醇）類作為碳源和能源，代謝產酸（如乳酸、醋酸、丙酸等），使酸鹼指示劑變色來斷定。

（指示劑為溴甲酚紫）結果判讀：陽性為變黃色； 陰性為紫色。

3%氯化鈉甘露醇發酵試驗

3%氯化鈉葡萄糖磷酸鹽腖水（VP試驗）

某些細菌能分解葡萄糖產生丙酮酸，並進一步將丙酮酸脫羧成為乙醯甲基甲醇，後面在鹼性環境下被空氣中的氧氧化成為二乙醯，進而與培養基中的精氨酸等所含的胍基結合，形成紅色的化合物，即VP試驗陽性。

我妻氏血瓊脂（神奈川試驗）

酵母膏粉、蛋白腖提供氮源、維生素、生長因子；高含量氯化鈉可以抑制非弧菌的細菌生長，不影響副溶血性弧菌生長；磷酸氫二鉀為pH緩衝劑；甘露醇為可發酵的醇；結晶紫抑制革蘭氏陽性菌，特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌；兔血紅細胞用於檢測副溶血性弧菌是否具有特定溶血素；瓊脂為凝固劑。

陽性結果為菌落周圍呈半透明環的β溶血。

副溶血性弧菌神奈川試驗陽性

ONPG試驗

β-半乳糖苷酶試驗是以有些細菌可產生β半乳糖苷酶，能分解鄰硝基酚-β半乳糖苷（ONPG），生成黃色的鄰硝基酚。

ONPG試驗