殘留溶劑方法建立及方法學的驗證

一、概述

藥物中的殘留溶劑係指在原料藥或輔料的生產中、以及在製劑製備過程中使用或產生而又未能完全去除的有機溶劑。根據有機溶劑對人體及環境可能造成的危害的程度， ICH將有機溶劑分為避免使用、限制使用、低毒和毒性依據尚不足四種情況。因殘留溶劑會影響產品的安全性，故需對其進行研究。

二、研究方法的建立及方法學驗證

在確定了需要進行殘留量研究的溶劑後，需要透過方法學研究建立合理可行的檢測方法。目前，殘留溶劑的測定一般採用氣相色譜法，推薦使用毛細管色譜柱- 頂空進樣系統，當然也可以使用普通填充柱，溶液直接進樣方法。對不宜採用氣相色譜法測定的含氮鹼性化合物，如N- 甲基吡咯烷酮等可採用其它方法，如離子色譜法等。

GC法具有檢測靈敏度較高，選擇性較好的特點，採用此法所需的樣品用量較少，基本可以滿足所有殘留溶劑測定的要求。採用GC法時，需要結合藥物和所要檢測的溶劑的性質，透過方法學研究確定合適的檢測條件。

1 研究方法的建立

1。1 確定被測的有機溶劑

根據製備工藝確定被測有機溶劑的範圍。通常應對製備工藝過程中使用的二類以上溶劑和重結晶用溶劑，以及根據工藝特點要求的其它溶劑進行殘留量的研究。建議對合成最後三步使用的三類溶劑也進行研究，這樣能更好地對未知峰進行歸屬；對製劑過程中使用的有機溶劑也建議考察其殘留情況，特別是緩、控釋微丸包衣過程使用的有機溶劑更應引起注意。

1。2 色譜柱選擇

按照相似相溶的原理選擇色譜柱。毛細管柱有極性柱、非極性柱、弱極性柱和中等極性柱。填充柱有高分子多孔小球或塗漬適宜固定液的填充柱。測定含氮的鹼性有機溶劑時，由於普通氣相色譜儀的不鏽鋼管路、進樣器襯管等對有機胺等含氮的鹼性化合物具有較強的吸附作用，致使其檢出的靈敏度降低。通常採用弱極性色譜柱或經鹼處理過的色譜柱分析含氮的鹼性有機溶劑，如果採用胺分析專用柱進行分析，則效果更好。

1。3 進樣方法

GC 法包括溶液直接進樣和頂空進樣兩種進樣方法。通常情況下，沸點低的溶劑建議採用頂空進樣法，沸點高的溶劑可以採用溶液直接進樣法，當樣品本身對測定有影響時，也建議採用頂空進樣法。

1。4 供試品溶液和對照品溶液的配製

對於固體原料藥，如採用溶液直接進樣法，需先用水或合適的溶劑使原料藥溶解，以使其中的有機溶劑釋放於溶液中，才能被準確測定。如採用頂空進樣法，通常以水作溶劑；當藥物不溶於水，但可溶於一定濃度的酸或鹼液中時，可採用不揮發的酸或鹼液為溶劑，但不

能使用鹽酸溶液或氨水；對於非水溶性藥物，可採用合適的溶劑，如N，N—二甲基甲醯胺、二甲基亞碸等為溶劑。以DMSO 等為溶劑時，可加入一定量的水以增加檢測的靈敏度，或用鹽析的方法增加靈敏度。

1。5 供試品溶液和對照品溶液濃度的確定

配製供試品溶液的濃度應滿足定量測定的需要，一般供試品取樣量在0。1 ~1g之間。限度檢查時對照品溶液的濃度可按規定的限度配製，定量測定時按實際殘留量配製，濃度相差最好以不超過 2 倍為宜。

1。6 檢測器的選擇

一般選用FID檢測器，對含鹵素的有機溶劑如氯仿等，採用 ECD檢測器可得到更高的靈敏度。通常可根據藥物溶劑的殘留情況選擇合適的檢查方法。當需要檢查的有機溶劑數量不多，且極性差異較小時，可選擇毛細管色譜柱 - 頂空進樣-等溫法。當需要檢查的有機溶劑數量較多，且極性、沸點差異較大時，可選擇毛細管色譜柱 -頂空進樣- 程序升溫法；也可選擇填充柱或適宜極性的毛細管柱直接進樣法。

1。7 頂空進樣法還要對頂空溫度和頂空時間進行選擇

頂空溫度應根據溶解供試品溶劑的特性及供試品中殘留溶劑的沸點選擇。以水為溶劑及測定低沸點殘留溶劑時，頂空溫度不宜超過85 ℃；測定沸點較高的殘留溶劑時，通常選擇較高的頂空溫度；但此時應兼顧供試品的熱分解特性，儘量避免供試品產生的揮發性熱分解產物干擾測定結果。以 DMSO為溶劑時，頂空溫度不宜超過115 ℃。例如，在申報資料中發現，以水為溶劑，頂空溫度為100 ℃，柱溫 60℃，結果高濃度的乙腈比低濃度的二氯甲烷的峰面積還小，原因是頂空溫度太高，大量的水被蒸發（或濃度被稀釋），隨著水蒸汽的凝結，在水中溶解度大的乙腈的靈敏度下降，產生了與事實不符的實驗結果。

頂空時間是要確保供試品溶液的氣-液兩相達到平衡，一般透過測定頂空時間與頂空氣體濃度的濃度 —時間曲線來確定。頂空時間不宜過長，一般為30~45分鐘，如果超過 60min ，可能引起頂空瓶的氣密性變差， 導致定量的準確性降低。如果平衡時間選擇 10分鐘，就不能保證氣- 液兩相達到平衡。對照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。

2、方法學驗證

2。1系統適用性試驗

柱效：用被測物的色譜峰計算，填充柱法的理論板數應大於1000 ，毛細管色譜柱的理論板數應大於 5000。

分離度：色譜圖中被測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應大於1。5 。

重複性：以內標法測定時，對照品溶液連續進樣5次，所得被測物與內標物峰面積之比的相對標準偏差 （RSD）應不大於5% ；以外標法測定時，所得被測物峰面積的相對標準偏差 （RSD）應不大於 10% 。

2。2專屬性

對各種殘留溶劑定位和進行混合溶劑的分離度試驗，分離度應大於1。 5 。同時空白溶劑對被測溶劑無干擾。

2。3線性

至少製備6個濃度（如定限，10%，20%，40%，60%，80%，100%，120%殘留溶劑限度水平），相關係數不小於0。99。

2。4檢測限和定量限

檢測限為信噪比3～5時相應濃度或注入儀器的量。定量測定時需驗證定量限，其限度為信噪比10～15時相應濃度或注入儀器的量。定量限應不高於殘留溶劑限度的50%。

2。5精密度

2。5。1重複性

連續進樣6次，標準溶液峰面積RSD不得大於10%。

2。5。2中間精密度

不同時間，不同實驗人員，不同儀器，測得的供試品溶液中殘留溶劑的峰面積RSD不得大於10%。

2。6準確度

在規定的範圍內，至少9個測定結果。設計三個不同的濃度（一般加入80%，100%，120%三個不同限度濃度的標準溶液）進行測定，計算回收率和相對標準偏差，回收率應在80%～120%，各濃度水平回收率的RSD應不大於2。0%。

2。7耐用性

透過改變柱流速，初始柱溫，色譜柱型號等，考察色譜引數的微小變化對結果的影響。

整理/註冊圈