脂肪酶活性（酶活）檢測試劑盒（銅皂法）

【Boxbio】脂肪酶活性檢測試劑盒（貨號：

AKFA006

）

脂肪酶（LPS）又稱甘油酯水解酶，屬於催化長鏈酯鍵水解和形成的酶類，對油水介面具有親和力，可催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或甘油二酯和單酯）。脂肪酶普遍存在於動植物組織及微生物中，其活性測定對於脂肪代謝分析具有重要意義，血清中脂肪酶活性測定可用於疾病的診斷。

脂肪酶催化油酯水解成遊離脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率：脂肪酸與顯色劑中銅離子反應生成銅皂藍色絡合物，產物在710 nm處具有特徵吸收峰，透過吸光值變化即可表徵脂肪酶活性。

脂肪酶活性檢測原理

測定過程中所需要的儀器和試劑：可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、可調式移液器、臺式離心機、恆溫水浴/培養箱、無水乙醇、甲苯和蒸餾水。

1。粗酶液的製備（可根據預實驗結果適當調整樣本量和比例）

①組織：按照組織質量（g）：試劑一體積（mL）為1：（5-10）的比例（建議稱取0。1 g組織，加入1 mL試劑一）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 15000 rpm離心30 min，取上清置於冰上待測。

②細菌或細胞：離心收集細菌或細胞至離心管內，按照細菌或細胞數量（10個）：試劑一體積（mL）為（500-1000）：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1 mL試劑一）處理樣品，冰浴超聲破碎（功率300 W，超聲3 s，間隔7 s，總時間3 min），4℃ 15000 rpm離心30 min，取上清置於冰上待測。

③血清、培養液等液體樣本：直接檢測或使用試劑一適當稀釋後再進行檢測。

2.測定步驟

①分光光度計預熱30 min以上，調節波長至710 nm，甲苯調零。

②試驗前將試劑一和試劑二37℃預熱30 min。

③在離心管中依次加入下列試劑：

吸光值測定：吸取800 μL上層溶液於1 mL玻璃比色皿中，測定710 nm處測定吸光值，記為A測定，A標準和A空白；計算A測定=A測定-A空白，A標準=A標準-A空白。注：空白管只需測定1-2次。

標準曲線的建立：以60、30、15、7。5、3。75、1。875 mol/mL為橫座標（x），對應的A標準為縱座標（y），繪製標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將A測定帶入公式中得到x（mol/mL）。

注意事項

①實驗過程中須遠離火源，甲苯有毒，實驗過程中需佩戴手套和口罩；

②若測定吸光值超出標準線性吸光值範圍，可以增加樣本量或將粗酶液使用試劑一適當稀釋後再進行測定，計算時相應修改；

③為保證結果準確且避免試劑損失，測定前請仔細閱讀說明書（以實際收到說明書內容為準），確認試劑儲存和準備是否充分，操作步驟是否清楚，且務必取2-3個預期差異較大的樣本進行預測定，過程中問題請您及時與工作人員聯絡。

For Research Use Only。 Not for Use in Diagnostic Procedures。