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小分子的RNA從聚丙烯醯胺凝膠轉移時,毛細管或真空轉移是無效的

2022-08-01由 王胖子的人生 發表于 農業

印跡雜交是什麼呢

最後,在固定核酸的過程中,硝酸纖維素膜在真空80C烘烤時變脆。變脆的膜經受不住以後2~3輪的在高溫下進行雜交和沖洗的過程。

透過引入各種型別的尼龍膜使得這些問題得以解決,尼龍膜能不可逆地和核酸結合,並且比硝酸纖維素膜更經久耐用(Reed and Mann 1985),而且如果損壞還可以修補(Pitas1989),因此被固定的核酸可以和幾種不同的探針雜交。

而且,因為核酸可以在低離子強度的緩衝液中固定到尼龍膜上,核酸從凝膠到尼龍膜可以進行電轉移。

小分子的RNA從聚丙烯醯胺凝膠轉移時,毛細管或真空轉移是無效的

當小分子的RNA從聚丙烯醯胺凝膠轉移時,毛細管或真空轉移是無效的,這時可以利用這種方法。

兩種型別的尼龍膜可以買到:未經修飾的(中性的)尼龍或帶電荷的尼龍,因其攜帶有胺基基團而稱為正電或(+)尼龍膜(其簡要發展史參見資訊欄中“尼龍的發展”)。

這兩種型別的尼龍膜都能結合單鏈或雙鏈核酸,並且在水、0。25mo/L HCL、0。4mo/L NaOH中結合量是不同的。

帶電荷尼龍有更好的結合核酸能力(表6-6),但是有導致雜交背景升高的傾向,這至少部分由於RNA中帶負電荷的磷酸基團非特異地結合到帶正電荷的多聚體表面。然而,在預雜交和雜交中可以透過增加阻斷劑的量來控制這種非特異結合。

小分子的RNA從聚丙烯醯胺凝膠轉移時,毛細管或真空轉移是無效的

現有的不同品牌尼龍膜帶電荷的型別和程度不同,網眼的密度也不一-樣。在不同的條件下,用於做Northem印跡和雜交的膜的有效性在不同的時間內都有所比較。而且,不同的製造商都提供具體的建議。