ELISA實驗常見問題（一）

ELISA實驗原理簡單，步驟少，流程短，試劑盒操作相對簡便，實驗小白也能輕鬆上手。然而，實驗上手雖快，想要得到可靠的實驗結果，卻並不那麼容易。

為了更好地助力實驗，這裡將大家關心的

ELISA試劑盒＆樣本常見問題

整理如下：

試劑盒

Q1

你們的ELISA試劑盒能檢測什麼物種？

A1

目前我們的試劑盒檢測的種屬主要為

人、小鼠、大鼠

；小部分指標涉及

猴、兔、豬、雞

等特殊種屬。

如果試劑盒的命名帶有特定指向（如人），代表專門針對此物種；沒有指明物種，則代表該試劑盒在目前公司產品涉及的種屬（例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等）內通用；其他特殊種屬的檢測適用性，請聯絡技術支援確認。

Q2 96T ELISA試劑盒能檢測多少樣本？是否需要做復孔？

96T ELISA

為了保證實驗結果的準確性，我們

試劑盒能檢測多少樣本？是否需要做復孔？

，但並不強行要求ELISA實驗一定要做復孔/3復孔，客戶可根據自己的需求設定復孔實驗。詳細資訊見下表：

A2

建議標準品和樣品都做復孔

Q3

為保證結果的準確度，不建議減少標曲的孔數，請

需檢測的樣品較多，能否減少標曲的孔數？

（含空白孔）。

A3

確保能夠檢測至少6個不同的標準品濃度

Q4

ELISA

雖然ELISA實驗的操作步驟相同，但每次實驗的各種影響因素都會有所變化。所以，

試劑盒要使用多次，但樣本較多，是否可以只做一次標曲？

，以得到更準確可靠的檢測結果。

如果需要做多次實驗，溶解後的最高濃度標準品可以分裝保存於-20℃條件下，避免反覆凍融，半個月內使用有效。

A4

每次實驗時，都必須重新繪製標準曲線

樣本

Q1 血清血漿樣本應該選用哪種真空採血管收集？

（通常為紅色、黃色、橘色管蓋的採血管）

Q1

（通常為綠色、紫色管蓋的採血管）

樣品收集後，若在1周內進行檢測，可保存於2-8℃條件下；若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存於-20℃條件下（1個月內檢測）或-80℃條件下（3個月內檢測），避免反覆凍融。

檢測前，應緩慢融化冷凍過的樣本，並離心除去凍融過程中產生的沉澱物。

A1

血清：不含抗凝劑的採血管/含促凝劑採血管

血漿：含抗凝劑的採血管

溶血可由多種理化因素和毒素引起。在體外，機械性強力振盪、低溫冷凍等誘因均可引起溶血。

Q2

（1）靜脈採血時，回抽壓力不宜過大；

（2）一次性採血量不宜過少；

（3）採集的全血不宜激烈振盪；

（4）離心轉速不宜過大；

（5）收集的全血需儘快處理成血清/血漿，全血不能凍融；

（6）若需要麻醉採血，需使用沒有溶血作用的麻醉劑。

採集時，如何儘可能避免溶血現象？

A2

為避免溶血對檢測結果產生影響，應注意：

Q3

組織研磨後，將其-80℃放置1h/液氮放置0。5h，再置於30℃水浴鍋中輕微振盪，使其迅速融化，反覆操作1-2次即可；

組織/細胞樣本收集中提到的“反覆凍融”，過程應該如何操作？

按上述操作步驟，反覆凍融2-3次。若為膜蛋白，可以適當做超聲處理，但需要控制好超聲的溫度、頻率；

A3

組織樣本：

細胞樣本：

建議在樣本中提前加入蛋白酶抑制劑。常規情況下推薦使用PMSF。

試劑盒的檢測範圍不等同於樣本中待測物的濃度範圍，

Q4

。

如果是常規樣本型別，可以諮詢ELISA技術支援，以獲取樣本的推薦稀釋倍數，並安排預實驗檢測；

如果樣品中待測物的濃度過高或過低，請對樣本做適當的稀釋或濃縮；

如果樣本中的分析物濃度遠低於試劑盒的最低檢測限，建議選擇靈敏度更高的試劑盒來檢測。