一般培養試劑介紹！看完輕鬆度過新手期，助力細胞實驗！

合成培養基（液）基本成分有哪些？

合成培養基的種類雖多，但一般均含有氨基酸、維生素、糖類、無機離子和一些其它的輔助性成分。

（1）氨基酸：是合成培養基的主要成分，合成培養基中以必需氨基酸為主。不同種類的細胞對氨基酸的要求也不同，但有幾種氨基酸細胞自身不能合成，必須依靠培養液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨醯胺是細胞合成核酸和蛋白質必需的氨基酸，在缺少谷氨醯胺時，細胞生長不良而死亡。

（2）維生素：細胞生長代謝中大多數的酶、輔酶是依靠維生素來形成的。在細胞培養中，儘管血清是維生素重要來源， 但是許多培養基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長。

（3）糖類：培養基中的碳水化合物包括葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉等，主要提供細胞生長的能量，也可參與合成蛋白質和核酸。

（4）無機離子：培養基含有平衡鹽溶液的鉀、鈉等無機鹽，有些培養基含有微量元素，如Fe2+、Zn2+、Ca2+等。

（5）其它成分：有時可在少數合成培養基中加入代謝的中間產物、氧化還原劑、三磷酸腺苷、輔酶A等。為適應某些特殊培養的需要可以補加一些新的成分，如雜交瘤技術中常用的DMEM培養液，使用時還需要補加丙酮酸鈉和2-巰基乙醇。

平衡鹽溶液

平衡鹽溶液（BSS）是組織細胞培養中常用的基本液體。它可以維持滲透壓、調節pH值及供給細胞生存所需的能量和無機離子成分。主要作為合成培養基（液）的基礎液及用於洗滌組織、細胞等。常用的平衡鹽溶液有PBS、Hanks液（HBSS）與D-Hanks液等。各種平衡鹽溶液的主要區別在於氯化鈉的濃度、離子的濃度及緩衝系統不同，可根據需要選用適當的平衡鹽溶液。

消化液

原代培養中欲分散組織、細胞時，傳代中欲使細胞脫離附著的底物時均需使用消化液。組織細胞培養中常用的消化液為胰蛋白酶、EDTA兩種溶液，使用時可以單獨使用或混合使用。

胰蛋白酶是從動物胰臟分離的一種水解酶，其主要功能為使細胞間的蛋白質水解、細胞分散。胰蛋白酶分離細胞的能力與細胞種類及細胞的特性有關，不同種類的細胞以及不同數量的細胞採用胰蛋白酶消化的時間亦不相同。濃度大、溫度高、新配製的胰蛋白酶可使細胞分離速度增快。胰蛋白酶溶液在pH8。0，溫度為37℃時，作用能力最強。

注意：鈣離子、鎂離子和血清蛋白的存在會降低胰蛋白酶活力。消化細胞時，加入一些血清或含血清的培養液，或胰蛋白酶抑制劑能終止胰蛋白酶對細胞的消化作用。

儲存條件：配製好的胰蛋白酶溶液必須儲存在-20℃冰箱中，以免分解失效。

請在溶解的一週內使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液

EDTA是一種化學螯合劑，主要作用為能螯合Ca2+、Mg2+，使細胞分離，對細胞毒性小。常用的濃度為0。02%。

胰蛋白酶和EDTA聯合使用可提高消化效率，但需注意EDTA不能被血清中和，使用EDTA處理細胞後，一定要用Hanks液沖洗乾淨，因殘留的EDTA會影響細胞生長。

液體培養基怎麼儲存？

（1）液體培養基應於4℃冰箱避光儲存，實驗前需放入37℃預熱再用。

（2）未加血清液體培養基存放期為12個月，加入血清的液體培養及存放期為6個月。

（3）液體培養基中的L-谷氨醯胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細胞生長不良，可以再新增適量L-谷氨醯胺。

液體培養基偶然被凍，可否繼續使用？

如果細胞培養基偶然被凍，您應該融化培養基並觀察是否有沉澱產生。如果沒有沉澱產生，培養基可以正常使用，如果出現沉澱，只能丟棄這些培養基。

培養基及其它新增物和試劑可反覆凍融嗎？

大部分新增物和試劑最多可以凍融3次，如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉澱，將會影響它的效能。

為什麼有的培養基中要去掉酚紅？

酚紅在培養基中被用來作為pH值的指示劑，桃紅色表示中性pH，黃色代表酸性pH，紫色表示鹼性pH。但是酚紅具有一定的固醇類激素樣的作用，如雌激素樣作用，尤其對於所培養的哺乳類動物細胞，可能發生的固醇類反應不可忽視。為了避免酚紅干擾檢測結果，許多研究人員視情況不同來選擇是否使用含酚紅的培養基。

培養基中丙酮酸鈉的作用是什麼？

細胞通常以葡萄糖作為碳源，丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。如果沒有足夠的葡萄糖供應，細胞就會選擇丙酮酸鈉作為代謝底物。

在培養基中加入

HEPES

有何好處？

培養基中最常用的緩衝體系是碳酸氫鹽，它可提供營養，但卻在生理pH條件下會降低緩衝能力。而HEPES是一種很強的緩衝劑，能使細胞培養基在pH7。2-7。6條件下緩衝能力增強。

有關血清的常見問題

血清是細胞培養中最重要的元素之一。

（1）儲存血清最好的方法？

建議血清應儲存在-5℃至-20℃。需要長期儲存的血清必須儲存於-20℃至–70℃低溫冰箱中。然而，若存放於4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。由於血清結冰時體積會增加約10％，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預留一定體積空間，否則易發生汙染或玻璃瓶凍裂。

（2）如何解凍血清才不會使產品質量受損？

建議採用逐步解凍法：將-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清取出後先置於2℃-8℃冰箱中使之融解，然後移入室溫待全部溶解後再分裝。在溶解過程中需輕輕規則地搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一，減少沉澱的發生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝集而出現沉澱。

（3）血清解凍後發現有絮狀沉澱物出現，該如何處理？

血清中沉澱物的出現有許多種原因，但最普遍的原因是由於血清中脂蛋白的變性所造成的，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血渭解凍後，也會存在於血清中，亦是造成沉澱物的主要原因之一。但這些絮狀沉澱物並不影響血清本身的質量。

若您欲去除這些絮狀沉澱物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉澱物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。

（4）何謂熱滅活？

一般是以56℃， 30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟可以使補體去活化，而補體所參與的反應有：溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和啟用。

（5）有必要做熱滅活嗎？

實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉澱物的形成會顯著的增多，這些沉澱物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤認為是血清遭受汙染，而把血清放在37℃環境中，又會使沉澱物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

因此建議，若非必須，可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節省寶貴的時間，更確保血清的質量！

（6）如何避免沉澱物的產生？

在使用血清的時候，注意下列的操作：

①解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時改變的溫度太大（如-20℃至37℃），非常容易產生沉澱物。

②解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉澱的發生。

③請勿將血清置於37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。

④血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

⑤若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，並且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉澱物的增多。

預祝你的實驗順順利利！