血小板抗體檢測的臨床應用

一、血小板抗體簡介

血小板減少症(Thrombocytopenia)

是指外周血血小板計數（PLT）<100×10^9/L。通常情況下，血小板<50×10^9/L時，即存在面板、黏膜出血的風險；<20×10^9/L時，有自發性出血的高度風險；<10×10^9/L時則有極高的出血風險。單純血小板減少症的病因可分為血小板生成減少、血小板破壞增加和血小板分佈異常三大類。其中，原發性免疫性血小板減少症（Immune thrombocytopenia， ITP），既往亦稱特發性血小板減少性紫癜，約佔出血性疾病總數的1/3。臨床以面板黏膜出血為主，嚴重者可有內臟甚至顱內出血。因此鑑別免疫與非免疫性血小板減少、提高免疫性血小板減少症的診斷特異性，進而對症治療、避免嚴重出血事件發生顯得尤為重要！

血小板抗體

是由於血小板自身抗原免疫耐受性丟失，導致體液和細胞免疫異常活化所產生，可介導血小板破壞加速及巨核細胞產生血小板數量不足，是導致ITP發生的主要原因。此類血小板抗體靶點通常為血小板膜糖蛋白IIb（GPIIb）、GPIIIa、GPIb、GPIX和a顆粒膜蛋白140（GMP140）。

抗血小板特異性抗體檢測專案在免疫性及非免疫性血小板減少症的輔助診斷和鑑別診斷方面具有較高的敏感性及特異性，

具有較高的臨床應用價值。

二、血小板抗體的臨床應用

1、輔助診斷原發性免疫性血小板減少症

由於缺乏特異性的實驗室檢查指標，ITP的診斷目前仍是臨床排除性診斷。該病主要發病機制包括①體液和細胞免疫介導的血小板破壞增加；②體液和細胞免疫介導的巨核細胞數量和質量異常所致的血小板生成不足。血小板膜糖蛋白特異性自身抗體介導的血小板清除增加在ITP發病機制中發揮著重要作用。在《成人原發性免疫性血小板減少症診斷與治療中國專家共識（2016年版）》及《兒童原發性免疫性血小板減少症診療規範（2019）》中均將血小板抗體檢測作為推薦的實驗室檢測專案，可見其對ITP的診斷具有重要的臨床應用價值。

2、 鑑別診斷繼發性免疫性和非免疫性血小板減少症

2。1腫瘤化療相關性血小板減少症：

化療藥物可導致藥源性的免疫性血小板減少症。患者血液中可檢測到血小板特異性抗體，導致血小板破壞增多，血小板數量減少。

2。2血液病患者免疫機制異常所致血小板減少症：

有研究表明，部分再生障礙性貧血患者體記憶體在血小板特異性抗體，總陽性率為20%（6/30），其中GPIIb/IIIa抗體陽性率佔13。33%（4/30），GPIb/IX抗體陽性率佔10%（3/30），雙陽性率佔3。33%（1/30），提示部分再障患者的血小板減少與免疫因素有關，為再障的免疫抑制劑治療提供新的依據（中國實驗診斷學，2006）。

2。3感染相關的血小板減少症：

指由於細菌、病毒、真菌及其他病原體等感染引起的血小板減少。EBV和HCMV是較強的B淋巴細胞的多克隆活化因子，能刺激感染的B細胞產生與正常組織發生交叉反應的抗血小板自身抗體，從而導致血小板破壞增加。

3、指導臨床用藥

研究發現，抗GPIb抗體陽性的ITP患者對糖皮質激素的療效顯著差於抗GPIb抗體陰性的ITP患者，提示抗GPIb/Ⅸ抗體與ITP疾病的嚴重性和難治性有關。同時，IVIG對於抗GPIb抗體陽性的ITP患者僅部分有效或無效，潛在原因可能在於抗GPIb抗體為Fc非依賴性抗體，而IVIG的主要作用在於封閉Fc受體，因而不能有效減少抗GPIb抗體引起的血小板破壞（Am J Hematol， 2012）。大量的臨床研究資料表明，檢測抗血小板膜糖蛋白自身抗體對指導臨床用藥、制定個體化應對方案具有重要意義。

4、避免輸血不良反應

血小板輸注可用於預防和治療因血小板減少或血小板功能障礙所引起的出血。然而，反覆多次輸注血小板會產生血小板輸注耐受或血小板輸注無效現象。對血小板輸注患者進行抗血小板抗體檢測，可有效鑑別免疫及非免疫性因素所致的血小板輸注無效，具有較高的臨床應用價值。

三、檢測原理

將鼠抗人GPIX單抗（CD42a）、鼠抗人GPIb單抗（CD42b）、鼠抗人GPIIb單抗（CD41）、鼠抗人GPIIIa單抗（CD611）、鼠抗人GMP140單抗（CD62p）5種特異性單抗包裹5種熒光強度的聚苯乙烯微球形成免疫熒光微球，透過FITC標記的羊抗人IgG多克隆抗體作為示蹤物，用流式細胞儀檢測聚苯乙烯微球熒光強度分辨5種單抗，檢測FITC熒光強度判定樣品的陰陽性。

四、結果解讀

抗GPⅠb

抗GPⅨ

抗GPⅡb

抗GPⅢa

GMP140

結果解讀

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1。 五項任意一項陽性或全陽，提示存在免疫介導的血小板減少（鑑別血小板減少誘因），輔助診斷免疫性血小板減少症〔原發、繼發、合併）

2。 五項全陽提示免疫性血小板減少症複發率高，一線治療方案響應不佳

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1。 抗GPⅠb、GPIX 陽性提示存在免疫介導的血小板減少（鑑別血小板減少誘因），輔助診斷免疫性血小板減少症（原發、繼發、合併）

2。 抗GPⅠb、GPIX 陽性提示一線治療藥物響應不佳，免疫性血小板減少症複發率高

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1。 抗Ⅱb、Ⅲa 陽性提示存在免疫介導血小板減少（鑑別血小板減少誘因），輔助診斷免疫性血小板減少症（原發、繼發、合併）

2。 抗Ⅱb、Ⅲa 陽性提示一線治療藥物響應良好

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五項全陰排除免疫介導的血小板減少風險