胃蛋白酶（Pepsin）特性及測定方法（提供檢測試劑盒）

胃蛋白酶

Pepsin

又稱尿胃蛋白酶；E。C。3。4。23。1或3。4。4。1。

胃蛋白酶是一種消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主細胞（gastric chief cell）所分泌，功能是將食物中的蛋白質分解為小的肽片段。主細胞分泌的是胃蛋白酶原，胃蛋白酶原經胃酸或者胃蛋白酶刺激後形成胃蛋白酶，胃蛋白酶不是由細胞直接生成的。胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質成小肽段。一般用於神經性低酸症的鑑別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等症狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。

一、概況

1。反應式

式中R2與R分別為R1與R4所取代的L-氨基酸。最適pH值為1。5~2。0。

2。米氏常數

3。專一性

胃蛋白酶能催化水解各種肽類，其中包括相鄰連線有芳族或二羧酸的L-氨基酸的肽類。但是，此酶僅作用肽鍵，而不水解酯類與醯胺類化合物。這兩類氨基酸必須為L-構型；使a-氨基進行醯化作用，能增加水解二肽類的速度。若以穀氨酸取代谷醯胺則導致水解速度下降。

4。抑制劑

苯醯基溴化物、脂族醇類和二苯基偶氮甲烷皆為抑制劑。

5純度要求

所需的純度應為每毫克蛋白含 2500單位活性。

6。意義

胃蛋白酶是一種蛋白酶，它在胃液的酸性條件下，能水解蛋白質，胃細胞是合成胃蛋白酶的主要器官，胃蛋白酶是以不具活性的胃蛋白酶原形式分泌的。當 pH 為酸性時，胃蛋白酶原分解為胃蛋白酶（分子量為34500）；pH為12時，遊離的胃蛋白酶被破壞，而胃蛋白酶原卻呈穩定。

測定胃蛋白酶可診斷胃的疾病。患有阿狄森（Addison氏病粘液性水腫和垂體機能減退症的患者，此酶活性水平下降；然而，發現患有庫興氏綜合症（皮質醇增多症），甲狀腺機能亢進和生理緊張狀態下，此酶活性水平升高。

7。穩定性

將此酶製成冷凍乾燥製劑，於4℃乾燥條件下儲存，可穩定數月之久。

二、測定方法

可以利用胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產物酪氨酸在275nm下有特徵吸收峰。透過測定吸光值的變化來計算酶活。

最早提出的方法是，使用Folin-Ciocalteu試劑測量胃蛋白酶作用血紅蛋白而產生的酪氨酸量。生成的產物在578，691及750nm處有光吸收。Anson氏活性單位定為在pH

1。5，37℃條件下，作用30分鐘，能使血紅蛋白被分解出0。04毫克酪氨酸所需的酶量。另外一種方法是於280nm處測定酪氨酸量。後一種測定方法精確度好（變異係數為4。7%），並且反應保溫時間較短（10分鐘）。

由於胃蛋白酶具有某些類似凝乳酶活性，於是，有一種方法，系在pH4。9，37℃條件下，測定此酶催化牛乳酪蛋白凝聚（clotting）速度。此方法準確度不如上述方法，但仍可在臨床應用。

也曾使用了N-乙醯-L-苯丙氨醯-L-3，5-二碘酪氨酸作為底物測定胃蛋白酶；

可用茚滿三酮測定L-3，5-二碘酪氮酸。每分鐘作用底物的量即是胃蛋白酶活性的標度。可於570~578nm處跟蹤吸光率的變化。