土壤澱粉酶的測定方法（比色法）

土壤澱粉酶是土壤中催化澱粉水解的一類酶的總稱，主要來自於微生物。具體測定方法如下：

一、實驗試劑

所有試劑除註明者外，均為分析純。實驗用水為蒸餾水或去離子水或相當濃度的水。

（1）2%澱粉溶液；

（2）甲苯；

（3）3，5-二硝基水楊酸溶液：稱取0。5克二硝基水楊酸，溶於20mL 2mol/L氫氧化鈉和50毫升水中，再加入30克酒石酸鉀鈉，用蒸餾水稀釋至100mL（不超過一週）

（4）標準葡萄糖溶液：將葡萄糖先在50-58℃條件下，真空乾燥至恆重。然後取500mg溶於100ml蒸餾水中，即成葡萄糖標準溶液（5mg/ml）。再將此液稀釋10倍製成葡萄糖工作液；

（5）PH 5。6磷酸鹽緩衝液：量取1/15 M Na2HPO4（11。876g/l）0。5ml和1/15 M K2HPO4 （9。078g/l）9。5ml，混勻可得。

二、實驗儀器

（1）恆溫振盪水浴鍋（AAH44312K，JeioTech/傑奧特）；

（2）容量瓶（100 ml）、燒杯（盛濾液用）（50~100 ml）、50 ml三角瓶若干、電子天平（DV215CD，美國OHAUSI）；

（3）分光光度計（UV-1800PC）；

（4）可調移液器（5 ml）、可調加液器（50 ml）；

（5）其它常規儀器。

三、實驗步驟

（1）稱取適量土樣，置於50m三角瓶中，並加入5滴甲苯，注入10mL 2%澱粉溶液和10ml的磷酸鹽緩衝溶液，搖勻混合物後，放入恆溫水浴鍋中，在37℃C下培養24h；

另設無基質和無土對照

（2）培養結束時，加入35ml水，迅速過濾至50m容量瓶，並用水定容。

（3）從中吸取濾液1mL濾液（按實驗實際可調整），加3ml 3，5-二硝基水楊酸溶液，並在沸騰的水浴鍋中加熱5min，隨即培養結束時，加入35ml水，迅速過濾至50ml容量瓶，並用水定容。

（4）此時溶液因生成3-氨基-5-硝基水楊酸而呈橙黃色，最後

用蒸餾水定容至25mL，15min後在分光光度計上于波長508m處比色

每一土壤需做無基質對照，整個試驗需做無土壤對照。

四、繪製標準曲線

（1）在分析樣品的同時，取0、1、2、3、4、5、6、7mL葡萄糖工作液，分別注入50mL容量瓶中，並按與測定澱粉酶活性同樣的方法進行顯色，比色後以吸光度為縱座標，葡萄糖濃度為橫座標繪製標準曲線。

4。1。5、結果計算

以5h後1g土壤中葡萄糖的質量（mg）表示澱粉酶活性

式中：a為由標準曲線求得的葡萄糖濃度（mg/mL）；

V為顯色液體積（50mL）；

n為分

取

倍數；

m為烘乾土重（g）

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