核酸試劑採購指南

核酸試劑採購指南

PCR試劑簡單的理解就是用於做PCR的試劑。試劑中不應該存在對PCR反應有影響的雜質。像核酸、核酸酶，如果是水的話，鹽離子儘可能的小，最好是超純水。像一些鹽類，分析純的可以達到要求。

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PCR試劑的分類

1、提取試劑：

包括了各種提取

DNA的常用試劑，和純化DNA所用的試劑；

2、PCR擴增試劑：

主要是

taq酶，dntp，緩衝試劑，引物；

3、產物檢測試劑：

瓊脂糖、聚丙烯醯胺凝膠、

aps、tmed、eb等等。

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PCR試劑的原理

PCR的原理是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖的方向合成互補鏈。

PCR最有價值的應用領域就是

對感染疾病的診斷

。理論上，只要樣本有一個病原體存在，

PCR就可以檢測到。

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PCR試劑注意事項

1、PCR實驗一定要保管好試劑，防止交叉汙染，尤其是交叉使用，極易引起汙染。

2、NA處理最好用矽烷化塑膠管以防粘附在管壁上，所有緩衝液吸頭、離心管等用前必須高壓處理，常規消耗用品用後作一次性處理，避免反覆使用造成汙染。

3、超淨臺內設內供PCR用微量離心機、一次性手套、整套移液器和其它必須品，

移液品用一次性吸頭和活塞的正向排液器，

防止移液器基部汙染。

4、PCR

操作應戴手套並勤於更換

。

5、

成套試劑，小量分裝，專

—儲存

，防止它用。配製試劑用新器具，用後作一次性處理。

6、試劑管用前先瞬時離心，使液體沉於管底，減少汙染手套與加樣器機會。

7、引物稀釋時，要首先瞬時離心，以避免粉末狀引物在開蓋時彈出管外。

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PCR試劑的操作流程

1、試劑準備階段：

試劑準備是

PCR操作的第一個流程，

需要在試劑貯存和準備區的超淨工作臺或生物安全櫃進行

，用確保無汙染的移液器、槍頭及容器等進行分裝。

所有的

PCR體系都

應該在

-20C儲存

，除了

ddH 20之外，其餘的試劑組份需完全融化之後再加入，以免影響濃度。

配製反應體系應在

快速進行

，以減少非特異性擴增。

體系配製完成之後應馬上進行

PCR反應。

2、樣本製備階段：

樣本製備是整個

PCR反應中最為關鍵的環節，在接收樣本時一定要確保樣本的

密封性

以及

樣本編號的唯一性

。

嚴格遵守操作規程進行加樣操作，操作時候儘量少說話或者不說話。

所有操作需要在生物安全櫃內進行

，操作前後生物安全櫃需要進行紫外燈消毒，注意生物安全櫃中物品的排放。

3、核酸擴增：

在核酸擴增環節需要選擇質量好的

EP管，裝入反應體系的EP管上機前混勻、離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。

在樣本檢測的同時設立對照。

同時嚴密檢測

PCR擴增儀的各項效能指標，其中對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著質量。

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如何選購PCR試劑

一般試劑盒主要是針對酶分類，其次是分為

簡易操作混合體系和分開單獨體系

。

先說酶，你的基因如果是小於

2K，那麼普通的高保真酶就可以滿足。

如果是長片段就選擇各公司針對長片段設計的酶。如果不需要對序列保真度要求很高，只需要鑑定一下，那麼普通的

taq酶就夠了。

針對體系問題，如果你的基因有文獻參考成熟的體系，那麼一般就定混合體系那種

premix的就可以，如果對Mg離子等有特殊要求，就選擇分開自己配體系那種。