細菌內毒素(脂多糖)的的純化
2022-09-19由 科德角國際內毒素檢測 發表于 漁業
細菌內毒素在哪裡
脂多糖
(
Lipopoly saccharide,LPS
)
是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分,脂多糖對宿主是有毒性的。脂多糖只有當細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞
後才釋放出來,所以
叫作
內毒素
。
三氯醋酸法(Trichloroacetic
Acid,TCA
)、
酚水法
、
苯酚╱氯仿╱石油醚法
(
PCP
)、
DMSO法
、
高壓超聲處理法
所提取的
LPS
或多或少受到蛋白質、核酸及多糖的汙染,故需作一定的純化。
LPS的純化方法目前最常用的為超速離心(4萬轉×4小時,共三次),在這一條件下,LPS可沉澱下去,而蛋白質、核酸及多糖則保留在上清液中,去除上清液即可得到較為純化的LPS。
但是這一方法需時較長,且質量過關的超速離心機目前在國內亦不十分普及,故而難以推廣應用。我們在實際工作中體會到,用任何方法提取的
LPS
,可再以
PCP
純化一次(
140ml/g LPS
)
,然後只需一次超離,即可取得高度純化的
LPS
。
提取的
LPS
除可被蛋白質、核酸及多糖汙染外,還可被一些小分子物質,如多胺、陽離子
(
Ca++
、
Mg++
、
K+
等
)
的汙染。透過電透析可將這類小分子物質除去。此時形成的
LPS
為酸性
LPS
(由
LPS
中類脂
A
上的磷酸基團形成的
)
。應用鹼中和
LPS
,可變成
LPS
的鹽。如用
NaOH
中和則可變成
LPS
鈉鹽
,
而應用三乙基乙胺則可變成
LPS
三乙胺鹽、後者極易溶解於水,已廣泛地應用於生物學研究。
綜上所述,
LPS
提
取方法較多,應當根據菌種和實驗條件而選用合適方法。
PCP法對R型菌尤顯長處
,
高壓超聲法雖可用於S或R菌
,
但方法步驟繁雜
;
DMSO法與TCA法已很少用到
;
而酚水法無論產量,純度及物理性質均較滿意的,不失為一個實用的方法。
LPS
純化目前一般採用
PCP
法及一次超速離心,應用該法可使
LPS
汙染物包括蛋白質、核酸及多糖除去,而應用片透析方法
,
則可除去
LPS
中的小分子物質如多胺、二價陽離子,從而可得
LPS
轉化成實驗需要的鹽類。
本文節選自:《
細菌內毒素(脂多糖
)
提取
及其純化技術
》,文章作者:周炳榮。如有侵權,請聯絡刪除,謝謝