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細菌內毒素(脂多糖)的的純化

2022-09-19由 科德角國際內毒素檢測 發表于 漁業

細菌內毒素在哪裡

脂多糖

Lipopoly saccharide,LPS

是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分,脂多糖對宿主是有毒性的。脂多糖只有當細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞

後才釋放出來,所以

叫作

內毒素

三氯醋酸法(Trichloroacetic

Acid,TCA

)、

酚水法

苯酚╱氯仿╱石油醚法

PCP

)、

DMSO法

高壓超聲處理法

所提取的

LPS

或多或少受到蛋白質、核酸及多糖的汙染,故需作一定的純化。

LPS的純化方法目前最常用的為超速離心(4萬轉×4小時,共三次),在這一條件下,LPS可沉澱下去,而蛋白質、核酸及多糖則保留在上清液中,去除上清液即可得到較為純化的LPS。

細菌內毒素(脂多糖)的的純化

但是這一方法需時較長,且質量過關的超速離心機目前在國內亦不十分普及,故而難以推廣應用。我們在實際工作中體會到,用任何方法提取的

LPS

,可再以

PCP

純化一次(

140ml/g LPS

,然後只需一次超離,即可取得高度純化的

LPS

提取的

LPS

除可被蛋白質、核酸及多糖汙染外,還可被一些小分子物質,如多胺、陽離子

Ca++

Mg++

K+

的汙染。透過電透析可將這類小分子物質除去。此時形成的

LPS

為酸性

LPS

(由

LPS

中類脂

A

上的磷酸基團形成的

。應用鹼中和

LPS

,可變成

LPS

的鹽。如用

NaOH

中和則可變成

LPS

鈉鹽

而應用三乙基乙胺則可變成

LPS

三乙胺鹽、後者極易溶解於水,已廣泛地應用於生物學研究。

綜上所述,

LPS

取方法較多,應當根據菌種和實驗條件而選用合適方法。

PCP法對R型菌尤顯長處

高壓超聲法雖可用於S或R菌

但方法步驟繁雜

DMSO法與TCA法已很少用到

而酚水法無論產量,純度及物理性質均較滿意的,不失為一個實用的方法。

LPS

純化目前一般採用

PCP

法及一次超速離心,應用該法可使

LPS

汙染物包括蛋白質、核酸及多糖除去,而應用片透析方法

則可除去

LPS

中的小分子物質如多胺、二價陽離子,從而可得

LPS

轉化成實驗需要的鹽類。

本文節選自:《

細菌內毒素(脂多糖

提取

及其純化技術

》,文章作者:周炳榮。如有侵權,請聯絡刪除,謝謝