細胞克隆形成實驗的目的及實驗過程的注意事項

細胞克隆形成實驗

是測定單個

細胞增殖

能力的有效方法，常用於抗腫瘤藥物敏感性測定、基因治療、腫瘤放射生物學等方面的研究。細胞克隆形成實驗的常用方法有平板克隆形成和軟瓊脂克隆形成兩種。

平板克隆形成實驗與軟瓊脂克隆形成實驗的區別在於前者操作簡便，可直接將細胞接種於培養器皿培養，細胞間泌的促生長因子可在培養液中擴散，有助於克隆形成率的提高，適用於貼壁生長細胞。而軟瓊脂克隆形成實驗培養基需新增軟瓊脂，以模擬體內生長環境，適用於懸浮細胞。

細胞克隆形成實驗的注意事項：

1。 實驗成功的關鍵之一是細胞懸液的製備與接種密度，細胞一定要分散均勻，不能有細胞團，接種密度不能過大。

2。 接種完畢後，需將培養基置於37℃ 5% CO2及飽和溼度的細胞培養箱中培養2~3周，期間需每隔3 d換一次液，換液過程需緩慢加入培養基，避免將細胞吹起。

3。 當肉眼可觀察到培養皿中出現克隆後終止培養，棄上清，用PBS小心沖洗2~3次，而後固定15 min、結晶紫染色20 min，洗去染色液後觀察計數，克隆形成率=（克隆數/接種細胞數）×100%。

4。 在軟瓊脂克隆形成實驗中，需配置下層軟瓊脂和上層軟瓊脂，前者是為防止細胞貼附生長，後者是作為營養補充劑以及為防止下層瓊脂膠乾燥。

5。 軟瓊脂與細胞液混合時溫度不宜超過40℃，否則將會燙傷/死細胞。

6。 瓊脂經滅菌後應分裝備用，反覆加熱易導致瓊脂降解而產生毒性，且其硬度也會有所下降。

7。 不同細胞的生長能力有所差異，若細胞克隆率過低，可在培養基中新增胰島素等促克隆形成物質。

測試狗