牛肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒的應用

背景

［1-3］

牛肌酸激酶（CK）ELISA試劑盒運用雙抗夾心ELISA法定量測定血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清液和其他生物液體中（CK）含量。

實驗原理

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被牛肌酸激酶（CK）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛肌酸激酶（CK）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

牛肌酸激酶（CK）ELISA試劑盒

操作步驟

1。從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘板條用自封袋密封放回4℃。

2。設定標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3。樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4。除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min。

5。棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7。每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫座標，標準品的濃度值為縱座標，在座標紙上或用相關軟體繪製標準曲線，並得到直線迴歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

應用

［4］［5］

用於肌酸激酶（CK）家族與膝骨關節炎相關性的實驗研究

探究膝關節骨關節炎（KOA）患者的CK家族活性變化，及其與OA影像學分級的關係；瞭解CK家族與KOA患者抗氧化酶SOD的相關性，探討CK家族是否與OA疾病及氧化應激機制的相關。

方法：本文系統研究回顧了100例健康人群、103例膝關節OA患者人群的血清指標。採用免疫抑制率法測定兩組血清CK-MB和CK水平。利用計算的方法得出CK-MM、CK-MB/CK、CK-MB/CK。採用獨立樣本t檢驗比較KOA患者與健康對照組血清（CK-MB、CK-MM、CK、CK-MB/CK、CK-MM/CK）水平，分析CK家族在KOA患者中血清學特徵。同時分析這些血清指標與Kellgren-Lawrence（KL）分級的相關性。

血清SOD活性採用比色法測定，利用SOD活性變化進行氧化應激KOA人群造模。然後利用此人群中肌酸激酶家族及SOD活性進行Pearson相關性檢驗，探討膝關節OA患者CK系統與SOD活性相關性，從而探究CK家族與氧化應激指標SOD的關係。利用KOA組中各引數均值變化趨勢探討各引數在KOA嚴重等級中的應用價值。

結果：本研究結果顯示，與健康對照組人群相比，KOA患者的CK-MM、CK活性顯著降低，CK-MM/CK比例降低，分別是CK-MM（t=2。869，P=0。004）P<0。05，CK：（t=2。596，P=0。010）P<0。05，CK-MM/CK：（t=5。900，P=0。000）P<0。001。KOA患者CK-MB活性顯著升高，CK-MB/CK比例增加，分別是CK-MB：（t=3。602，P=0。000）P<0。001，CK-MB/CK：（t=5。900，P=0。000）P<0。001。在KOA患者Kellgren-Lawrence（K-L）影像學分級的研究中：較K-L（1-2）級輕度KOA相比，K-L（3-4）級重度KOA患者CK-MM、CK明顯減低，CK-MM/CK同樣下降，分別是CK-MM：（t=3。569，P=0。001）P<0。05，CK：（t=2。985，P=0。004）P<0。05，CK-MM/CK：（t=4。885，P=0。000）P<0。001。而K-L（3-4）級重度KOA患者CK-MB/CK呈上升趨勢（t=4。885，P=0。000）P<0。001。CK-MB則無統計學意義。

與對照組相，KOA病例組SOD活性減低，SOD：（t=8。176，P=0。000）P<0。001，與K-L（1-2）級輕度KOA相比，K-L（3-4）級重度KOA患者SOD明顯減低，SOD：（t=5。771，P=0。000）P<0。001。利用兩組資料，在KOA人群中，我們發現血清SOD與CK-MM、CK、CK-MM/CK呈正相關關係。與CK-MB/CK呈負相關關係，與CK-MB相關性不顯著。

在KOA組中，CK-MM、CK、CK-MM/CK與SOD在KOA K-L（1-4）級變化趨勢相同，其中CK-MM/CK與SOD趨勢最為相近，利用以上指標可以有效評價KOA嚴重程度。

結論：研究證實一直被認為是心臟特定血清學標誌物的CK家族與KOA相關，它們參與了KOA疾病的發病、發展過程，肌酸激酶家族相關指標在KOA患者中存在活性減低，且KOA嚴重程度越大，活性變化越明顯，可能是由於OA的氧化機制可能對CK家族造成損傷，導致其活性減低。CK家族在OA患者血清中SOD存在相關關係，證實了我們的推測：CK家族可能具有類似SOD的抗氧化活性，與SOD在KOA患者嚴重程度中趨勢相同。

參考文獻

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