植物組織培養的培養條件

組織培養是什麼意思

在植物組織培養中溫度、光照、溼度等各種環境條件，培養基組成、PH值、滲透壓等各種化學環境條件都會影響組織培養育苗的生長和發育。

一、溫度（temperature）

因為溫度是植物組織培養中的重要因素，所以植物組織培養在最適宜的溫度下生長分化才能表現良好，大多數植物組織培養都是在23～27℃之間進行，一般採用25±2℃。低於15℃時培養，植物組織會表現生長停止，高於35℃時對植物生長不利。但是，不同植物培養的適溫不同。白鶴非的最適溫度是20℃、月季是25～27℃、番茄是28℃。溫度不僅影響植物組織培養育苗的生長速度，也影響其分化增殖以及器官建成等發育程序。如菸草芽的形成以28℃為最好，在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。

不同培養目標採用的培養溫度也不同，百合鱗片在30℃以下再生的小鱗莖的發葉速度和百分率比在25%以下的高。桃胚在2～5℃條件進行一定時間的低溫處理，有利於提高胚培養成活率。用35℃處理草莓的莖尖分生組織3～5d，可得到無病毒苗。

二、光照（light）

組織培養中光照也是重要的條件之一，主要表現在光強、光質、以及光照時間方面：

1、光照強度（light intensity）

光照強度對培養細胞的增殖和器官的分化有重要影響，從目前的研究情況看，光照強度對外植物體、細胞的最初分裂有明顯的影響。一般來說，光照強度較強，幼苗生長的粗壯，而光照強度較弱幼苗容易徒長。

2、光質（light wave）

光質對愈傷組織誘導，培養組織的增殖以及器官的分化都有明顯的影響。如百合珠芽在紅光下培養，8周後，分化出愈傷組織。但在藍光下培養，幾周後才出現愈傷組織，而唐菖蒲子球塊接種15天后，在藍光下培養首先出現芽，形成的幼苗生長旺盛，而白光下幼苗纖細。

3、光週期（light period）

試管苗培養時要選用一定的光暗週期來進行組織培養，最常用的週期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，對短日照敏感的品種的器官組織，在短日照下易分化，而在長日照下產生愈傷組織，有時需要暗培養，尤其是一些植物的愈傷組織在暗培養下比在光下更好。如紅花、烏飯樹的愈傷組織。

三、溼度（humidity）

溼度的影響包括培養容器保持和環境的溼度條件，容器內主要受培養基水分含量和封口材料的影響。前者又受瓊脂含量的影響。在冬季應當適當減少瓊脂用量，否則，將使培養基幹硬，以致不利於外植體接觸或插進培養基，導致生長受阻。封口材料直接影響容器內溼度情況，但封閉性較高的封口材料易引起透氣性受阻，也會導致植物生長髮育受影響。

環境的相對溼度可以影響培養基的水分蒸發，一般要求70%-80%的相對溼度，常用加溼器或經常灑水的方法來調節溼度。溼度過低會使培養基喪失大量水分，導致培養基各種成分濃度的改變和滲透壓的升高，進而影響組織培養的正常進行。溼度過高時，易引起棉塞長黴，造成汙染。

四、滲透壓（penetrating pressure）

培養基中由於有新增的鹽類、蔗糖等化合物，因此影響到滲透壓的變化。通常1-2個大氣壓對植物生長有促進作用，2個大氣壓以上就對植物生長有阻礙作用，而5-6個大氣壓植物生長就會完全停止，6個大氣壓植物細胞就不能生存。

五、PH值

不同的植物對培養基最適PH值的要求也是不同的，大多在5-6。5左右，一般培養基皆要求5。8，這基本能適應大多數植物培養的需要。

PH值適度因材料而異，也因培養基的組成而不同。以硝態氮作氮源和以銨態氮作氮源就不一樣，後者較高一些。一般來說PH值高於6。5時，培養基會變硬；低於5時，瓊脂不能很好地凝固。因為高溫滅菌會降低PH值（約0。2-0。3個PH值）因此在配製時常提高PH值0。2-0。3單位。PH值大小調節可用0。1M的NaOH和0。1M的HCl來調整。1ml的NaOH可使PH值升高0。2單位，1ml的HCl可使PH值降低0。2單位。調節時一定要充分攪拌均勻。

六、氣體（gas）

氧氣是組織培養中必需的因素，瓶蓋封閉時要考慮通氣問題，可用附有濾氣膜的封口材料，如易生組培熱銷的培養瓶蓋和封口膜本身帶有PTFE材質的濾菌膜，孔徑為0。2um，即保證通氣又可以濾菌。通氣最好的是棉塞封閉瓶口，但棉塞易使培養基幹燥，夏季易引起汙染。固體培養基可加進活性炭來增加通氣度，以利於髮根。培養室要經常換氣，改善室內的通氣狀況。液體振盪培養時，要考慮振盪的次數、振幅等，同時要考慮容器的型別、培養基等。