HPTLC 通用混標 (UHM):高效薄層色譜系統適用性測試 (SST) 新思路
2022-11-29由 力揚企業有限公司 發表于 農業
丁二醯亞胺溶於乙酸乙酯嗎
“在 HPTLC 系統中，每張板都代表一個新的分析體系。每次進行分析操作當天，在每個板上都應執行 SST，以驗證其是否符合實驗條件要求。SST 通常僅適用於包含預設限值在內的單個方法。如果 SST 失敗，則樣品檢測資料無效，無法進行評估。”
Dr。 Tin Do （CAMAG 實驗室主管）
在高效薄層色譜 （HPTLC） 中，應用合適的系統適用性測試 （SST） 在每個薄層板上對分析系統進行驗證非常重要，是資料有效性的前提，一般是選擇幾個具有特定分析方法的化學對照物質作為參考。但目前常用的 SST 實驗設計具有一定的侷限性，列舉《美國藥典》和《歐洲藥典》中關於 SST 的描述內容可見下表：
目前常用 SST 方法及其侷限性
SST 新思路
HPTLC 通用混標
針對上文列出的侷限性，UHM 應運而生，可用於在常規分析中驗證 HPTLC 結果，實現對 HPTLC 色譜圖的整個
R
F
範圍進行驗證。
什麼是 UHM ？
UHM, the Universal HPTLC Mix，即
高效薄層色譜通用混標
，由 8 種不同性質的化合物組成，廣泛適用於各種 HPTLC 方法的 SST 測試。
HPTLC 通用混標 (UHM) 的開發
01
物質的選擇
選擇的物質最好具有安全、穩定、無需衍生化即可檢測、易於獲得且價格低廉等特點。據此，實驗人員從數以千計的物質列表中，選擇了 24 種化合物。
針對這 24 種化合物在 HPTLC 板上的色譜行為進行研究，分別用 20 種不同展開劑進行洗脫，涵蓋儘量廣泛的極性和選擇性，最終從中選擇了 8 種化合物：鳥苷、舒利苯酮、胸苷、撲熱息痛、鄰苯二甲醯亞胺、氫芴、噻噸酮和 2-苯並三唑四甲基丁基苯酚。
圖為 UHM 在不同展開系統下的色譜行為，在各條件下的選擇性均可保證至少 3 - 4 個有效化合物的條帶均勻分佈在所需評估的範圍內
02
評估響應特性
相對溼度
對每種物質的選擇性有不同的影響。當板的活性偏離預期的相對溼度 0 - 5%、33%、75% 或 100% 時，UHM 的響應特性可以清楚地檢測出這些偏離。
對甲苯-乙酸乙酯 90：10 （V/V） 的
展開劑組成
施加每種組分溶劑 ±10% 的變化，用 UHM 獲得的 HPTLC 指紋圖譜有顯著反應。
針對相同的展開劑進行不同
飽和引數
設定的考察（不飽和、部分飽和和充分飽和）。結果表明，部分飽和
R
F
值相對增加，而完全飽和
R
F
值相對降低，UHM 可以檢測飽和操作的一般影響。
03
評估 UHM 效能
分別在實驗室內和實驗室間進行檢測，使用 3 種展開劑並得出 Δ
R
F
，評估 UHM 效能。
在實驗室內試驗中，Δ
R
F
為 0。029； 實驗室間試驗為 0。040。
04
評估不同型別的矽膠薄層板
在色譜系統中薄層板的材料是一個關鍵引數。由於矽膠的規格不同，例如不同的粘合劑或熒光指示劑的存在，不同的薄層板可能會有不同的選擇性。
使用 UHM 評估了 6 種不同型別的塗敷型矽膠薄層板，使用相同的展開劑，乙酸乙酯-甲酸-乙酸-水 100：11：11：26 （V/V）。
UHM 在不同型別矽膠薄層板上的
選擇性評估
UHM 與現行 SST 比較
使用 UHM 和現行的 SST 進行精油標準鑑別。
在原有方法中乙酸異丁香酚 ［1a］ 和異丁香酚 ［1b］ 被定義為 SST。作為特定標記物，使用的是芳樟醇和乙酸芳樟酯，或冰片和乙酸冰片酯。在這個例子中，還測試了 3 種精油：薄荷油、薰衣草油和肉豆蔻油。
針對 UHM 和當前 SST 的每個成分，計算平均
R
F
值及其預測區間。下圖資料表明，UHM 成分的預測區間與原始 SST 的預測區間在同一範圍內。
UHM 成分的預測區間與
原始 SST 的
預測區
間在同一範圍內
資料來源： CAMAG 與 Anchrom 印度合作實驗室
總結
HPTLC 通用混標 （UHM） 是當前 SST 的一個很好的替代方法。
8 種不同極性、不同化學類別組分的混合物價格低廉、穩定，對驗證色譜系統的變化具有良好的響應性。
與當前的 SST 相比，UHM 的成分顯示出與已建立的 SST 的物質和特定標記物具有相似的預測區間。
UHM 可以檢測展開劑梯度的變化或飽和效應，而許多已建立的 SST 通常只能描述有限的
R
F
範圍。
會議內容重溫
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由此可見，高效薄層色譜越來越受實驗人員的關注，原因不單在其快速、直觀、自由衍生的技術優勢，而且適用於複雜成分樣品的分離及檢測。從以上案例中，透過通用混標的應用，簡化 SST 方法開發週期，有效保證 HPTLC 在常規分析檢測中的資料重現性、有效性和可靠性。
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CAMAG HPTLC PRO 全自動色譜系統
CAMAG HPTLC PRO 全自動色譜系統實現連續多板之 “點樣 – 展開 –
衍生 – 檢測 – 分析 – 報告” 操作流程，是新一代的高效薄層色譜的領先技術。
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