線性聚乙烯亞胺 分子量40000 PEI

聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔兩個碳原子，即每第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網路在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體（proton sponge），因此，非常容易結合帶負電荷的核酸分子，形成帶正電荷的複合物顆粒，該顆粒與細胞表面陰離子結合，很容易透過內吞作用進入細胞；並且可抵禦溶酶體的降解作用，從而提高核酸分子的表達水平。

CAS

49553-93-7

分子式

（C2H5N）n 。 xHCl

分子量

40，000 （~22，000 free base）

熔點

73-75℃

溶解性

溶於冷水

不溶於

常用有機溶劑（乙醇、丙酮、四氫呋喃）

形式

白色固體粉末

生物毒性

未知

安全防護

手套，護目鏡，口罩

儲存

粉末至少可以儲存一年， PEI內含自由氨基，建議開封后4℃乾燥儲存，減緩氧化過程。

運輸

常溫運輸

特點

大量實驗資料反饋

，

細胞通用性好，

有非常好的轉染效果，尤其對293，CHO細胞繫有特別顯著的轉染效果。

線性聚乙烯亞胺 分子量40000 PEI（1g

線性聚乙烯亞胺 分子量40000 PEI（1g）

轉染操作流程：(

貼壁細胞

轉染方法

)

1。 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL1002）消化細胞並計數（不建議用胰酶）。將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔加入的細胞量參考下圖表1，一般18-24小時（sf9細胞為3-4小時）後轉染。轉染時細胞匯合度應至少達到 70~80%以上。轉染前更換為含5%血清的生長培養基。

2。 準備 DNA-PEI 複合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無血清培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒新增順序）。充分混勻後，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI複合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

（

稀釋PEI和DNA的體積為培養體積的1/10-1/20, DNA濃度為1ug/ml

）

3。 轉染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI複合物並輕輕渦旋培養板/培養皿。轉染4-6小時（sf9細胞為2小時 ）後，更換為生長培養基。

4。 孵育細胞和分析結果： 在 CO2培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染後最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定最適合檢測時間。

5。 轉染 24 h 後，將細胞傳代至新鮮的生長培養基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。

轉染操作流程：(

懸浮細胞

轉染方法

)

1。 轉染前準備：懸浮細胞傳代接種於適量含懸浮細胞生長培養基中，合適條件下培養。根據培養瓶大小調整細胞密度（例100mL培養瓶，1X10

6

cells/mL），然後旋緊瓶口放入搖床繼續培養，2~4小時後可以進行轉染。

2。 準備 DNA-PEI 複合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無血清培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每1μg DNA需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒新增順序）。充分混勻後，室溫靜置10~25 min以形成 DNA-PEI複合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

3。 轉染細胞：將PEI-DNA轉染複合物逐滴加入到細胞培養液中，搖勻後旋緊瓶口放回搖床合適培養條件下培養至可以分析檢測。

4。 孵育細胞和分析結果：轉染後一般24-72h即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定最適合檢測時間。

5。 如果要獲得更多的蛋白產量，有文獻表明轉染後24小時，可以適當稀釋細胞，稀釋比例參考範圍（1：2—1：5）之間，可以增加蛋白產量，稀釋效應與最佳稀釋比率應根據經驗確定。

線性聚乙烯亞胺 分子量40000 產品反饋

BIOHUB 生產的78Bio PEI是一種最佳化的線性陽離子聚合物轉染試劑，分子量分別為 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉染效率高，但毒性也略大於 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統中，相比於市面上的脂質體 78BioPEI 都表現出高的蛋白表達量（無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器），以及更小的細胞毒性、更高的轉染效和更高的可 重複性，並且十分經濟的高性價比轉染試劑。產品具有以下特點：

1。轉染效率高，細胞毒性低； 蛋白表達量高；

2。節約成本：BIOHUB 78 PEI轉染試劑 ，進口品質，親民價格，至少能夠降 40% 的轉染試劑總成本；

3。適用於 HEK293 等真核細胞的轉染；

4。適用於貼壁細胞和懸浮細胞的轉染；

5。適用於有血清和無血清的轉染條件；

6。 無機試劑，無動物源成分；

7。 產品穩定，質控嚴格；

8。 工藝流程適用範圍廣，容易最佳化 適合小規模培養板，培養瓶到大規模的生物反應器。