澱粉脫分支酶（DBE）活性檢測試劑盒（DNS比色法）

【Boxbio】澱粉脫分支酶（DBE）活性檢測試劑盒（貨號：

AKSU033

）

一、產品描述

澱粉脫分支酶（DBE）作為支鏈澱粉合成過程中的關鍵酶，能夠專一性裂解支鏈澱粉的α-1，6-糖苷鍵，對澱粉最終結構的形成起著重要作用，可透過調整支鏈澱粉側鏈的鏈長賦予澱粉不同的理化特性，對於澱粉生物合成、優質農作物品種選育和品質遺傳改良等方面的研究具有重要意義。

澱粉脫分支酶能夠催化支鏈澱粉生成還原糖，進一步與3，5-二硝基水楊酸反應生成棕紅色氨基化合物，產物在540 nm處具有特徵吸收峰，透過吸光值的變化即可表徵澱粉脫分支酶的活性。

澱粉脫分支酶活性檢測原理

1。粗酶液的製備（可根據預實驗結果適當調整樣本量及比例）

①組織：按照組織質量（g）：提取液體積（mL）為1：（5-10）的比例（建議稱取0。1 g組織，加入1 mL提取液）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 12000 g離心10 min，取上清置於冰上待測。

②細菌或細胞：離心收集細菌或細胞至離心管內，按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為（500-1000）：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1 mL提取液）處理樣品，冰浴超聲破碎（功率300 W，超聲3 s，間隔7 s，總時間3 min），4℃ 12000 g離心10 min，取上清置於冰上待測。

③培養液等液體樣本：直接檢測或使用提取液適當稀釋後再進行檢測。

2。測定步驟

①分光光度計預熱30 min以上，調節波長至540 nm，蒸餾水調零。

②滅活粗酶液的製備：取適量粗酶液沸水浴處理5 min（密封以防止水分散失），冷卻至室溫，12000 g常溫離心5 min，取上清即為滅活粗酶液。

吸光值測定：將反應液置於1 mL玻璃比色皿中，測定540 nm處吸光值，記為A測定、A對照、A標準和A空白；計算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標準=A標準-A空白。注：空白管只需測定1-2次，每個樣品均需設一個對照管。

標準曲線的繪製：以0。5、0。4、0。3、0。2、0。15、0。1 mg/mL標準稀釋液濃度為橫座標（x），對應的ΔA標準為縱座標（y），得到線性迴歸方程y=kx+b，將ΔA測定帶入公式中計算x（mg/mL）。

四、注意事項

①試劑一配置後為懸濁狀態，每次加入前應充分混勻；

②若測定吸光值超出標準線性吸光值範圍：高於最高值建議將粗酶液使用提取液適當稀釋後再進行測定，低於最低值建議適當增加樣本量重新提取後再進行測定，計算時相應修改；

③沸水浴處理後應確保冷卻至室溫再進行吸光值測定，且各組間冷卻時間應保持一致；

④為保證結果準確且避免試劑損失，測定前請仔細閱讀說明書（以實際收到說明書內容為準），確認試劑儲存和準備是否充分，操作步驟是否清楚，且務必取2-3個預期差異較大的樣本進行預測定，過程中問題請您及時與工作人員聯絡。

For Research Use Only。 Not for Use in Diagnostic Procedures。